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賽爾瑞成（北京）生命科學技術有限公司
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1、使用賽多培®噬菌體抑制劑與現有噬菌體防治手段相比有哪些優勢？
在生物醫藥（抗生素、疫苗、蛋白藥物、基因治療載體）、工業酶制劑、生物反應器工藝研究等依賴大規模細菌培養的領域，傳統防治噬菌體的方法（如設備消毒、菌種輪換）成本高且無法預防噬菌體污染，如果一旦發生噬菌體污染，會導致批次發酵失敗，造成大量物料損失和人工成本的浪費。傳統噬菌體消殺步驟繁瑣，且需要耗費大量時間，影響研發和生產進度。
賽多培®噬菌體抑制劑可以作為細菌培養的保護劑使用，盡最大可能保證發酵成功率，避免物料損失，同時減輕了環境消殺等成本。抑制劑作為直接添加的解決方案更便捷。
2、噬菌體抑制劑抑制噬菌體的原理是什么？抑制劑的添加會影響菌的生長和蛋白表達水平嗎？
賽多培®噬菌體抑制劑主要抑制噬菌體的生長繁殖。根據我們實驗驗證，進行大腸桿菌培養時，用富營養培養基例如TB培養基、2YT培養基、賽多培®增強型LB預混培養基、賽多培®大腸桿菌高密度表達培養基等，抑制劑的添加不會影響菌的正常生長。若使用普通LB培養基，因為營養不充分，噬菌體抑制劑的添加對菌的生長有抑制作用，可以嘗試用如下方案減小噬菌體抑制劑對菌的抑制作用：①延長細菌培養時間2-4h；②根據環境爆發的劇烈程度，嘗試減量使用；③通過增加溶氧的方式提高菌的生長速度；④若使用搖瓶培養，建議抑制劑在OD600在0.8-1之間的時候添加噬菌體抑制劑，若使用發酵罐培養，菌生長到OD600 1-2左右再添加抑制劑，上述四種方案可以根據實際實驗需求組合使用。
噬菌體抑制劑的添加對蛋白的正常表達不會產生影響。
3、說明書中，噬菌體抑制劑的用量是一個范圍值，在使用時究竟按照什么比例添加？
通常情況下，每升培養基添加2毫升抑制劑液體（1000:2）即可顯著發揮抗噬菌體效果，保障菌體正常生長。
在噬菌體污染嚴重的環境中，或使用發酵罐進行高密度發酵時，為保證噬菌體抑制效果，每升培養基可添加6毫升抑制劑液體（1000:6）。
抑制劑在富營養的培養基中，最高可以加到10ml，LB培養基中可以最高加到6ml。建議2ml考慮的是使用成本問題以及菌體生長速率問題。我們的建議用量主要考慮使用成本、菌體生長速率以及噬菌體污染情況確定的。如果環境中噬菌體處于高爆發期間，建議增加用量。
4、加噬菌體抑制劑一點效果都沒有，什么原因？
添加噬菌體抑制劑沒有效果的原因有多種，經過我們與客戶溝通，常見有如下原因：①搖瓶培養發現過夜菌不長，大概率是菌種活性問題，同時也需要觀察是否存在培養條件失控、裝液量過大的情況；②環境中噬菌體爆發期，建議通過小型梯度實驗，摸索合適用量；③實驗室內部除了噬菌體之外，可能存在真菌、曲霉、金黃色葡萄球菌等雜菌污染，這就需要進行嚴格的消毒處理、執行嚴格的無菌操作規范，以避免雜菌污染帶來的影響。
為此，我們根據實際操作經驗，可以通過下面方法對培養體系的污染情況進行判斷：
如果只有細胞碎片，大概率是噬菌體污染；
如果OD600值在1以下時菌出現死亡（菌體生長1-3小時，誘導前），則考慮感染烈性噬菌體；
如果OD600值在1到2之間，誘導之后逐漸開始死亡（有些1-3小時，有些5小時左右），則考慮溫和噬菌體污染；
如果同時伴有白色絮狀物，或粘性的，或拉絲狀的，或蘑菇狀的，或有聚集狀白色的，則考慮伴隨雜菌污染。
5、添加抑制劑后，細菌在發酵罐中前期不生長或生長緩慢？
出現OD600值到2-3后，不再增長時，請仔細檢查發酵罐罐壓是否穩定，建議增加通氣量。
如果生長緩慢，那么建議抑制劑在OD600 1-2左右時進行添加。
環境惡劣的情況下，在誘導時進行抑制劑補加，具體用量視環境污染程度而定。
6、用發酵罐發酵時，添加了抑制劑，前期比較正常，但后期出現菌體死亡，這是什么原因？
出現這種情況，主要應對發酵操作過程進行排查。以下原因往往會導致發酵后期菌體死亡：
① 營養物質耗盡。發酵后期，碳源（如葡萄糖）、氮源（如銨鹽）或其他關鍵營養（如磷酸鹽、微量元素）可能耗盡，導致細菌無法維持代謝活動。主要表現為溶氧突然上升（細菌停止耗氧）、pH異常波動（代謝活動停滯）。
② 代謝產物積累。細菌代謝產生的副產物（如乳酸、乙酸、乙醇、氨、CO?等）可能達到毒性濃度，抑制生長甚至導致死亡。
③ 溶解氧（DO）不足或過量。
好氧菌：后期菌體密度高，需氧量大為增加，若供氧不足（攪拌或通氣不足），會導致缺氧死亡。兼性厭氧菌：過量溶氧可能誘導氧化應激反應（如自由基積累）。
④ pH失控。代謝產物（如有機酸、堿）導致pH超出菌種耐受范圍，影響酶活性和細胞膜穩定性。
⑤ 溫度波動。發酵后期代謝產熱增加，若冷卻系統失效，溫度升高可能引起蛋白質變性或代謝紊亂。
⑥ 菌種自身問題。質粒丟失、基因突變或代謝途徑異常（如過度表達外源蛋白導致“代謝負擔"）。
⑦ 雜菌或噬菌體污染。雜菌競爭營養或分泌毒素。如果添加了噬菌體抑制劑，一般不會在后期出現噬菌體感染導致細菌裂解情況，但也存在因通氣帶來噬菌體持續性輸入，影響抑制劑效果，建議補加噬菌體抑制劑。
7、抑制劑是否再次滅菌？該如何添加？
賽多培®噬菌體抑制劑生產過程中，會進行0.22μm過濾除菌和高溫滅菌處理，無需再次滅菌。可以按照說明書指導比例或實際需要的比例，直接加入到搖瓶或發酵罐的培養基（滅菌后）中，添加方式與抗生素相同。
8、噬菌體抑制劑大量使用一段時間后是否會產生抗藥性呢？
不會產生任何抗藥性，請放心使用。
