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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | #K0709-01-2 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合 |
novocib：PRECICE® HPRT Assay Kit 貨號：#K0709-01-2
24 analyses (8 samples in triplicate) with HPRT enzyme
PRECICE® HPRT 檢測試劑盒提供了第一個用于測量 HPRT 活性的非放射性方案，采用方便的 96 孔板形式。
次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶 （HPRT， EC 2.4.2.8） 是嘌呤補救途徑的關(guān)鍵酶，由高度可變的 HPRT1 基因編碼。已描述與人類遺傳疾病相關(guān)的 HPRT1 基因中有 300 多種突變導致 HPRT 酶部分或全缺乏。完*性 HPRT 缺乏癥是一種罕見的人類遺傳病，也稱為 Lesch-Nyhan 綜合征。在某些情況下，痛風，更常見的嘌呤紊亂，也可能繼發(fā)于 HPRT 缺乏癥（Ceballos-Picot I. 等人，2010 年）。HPRT1 基因的高變異性使基因檢測復雜化。目前，使用放射性標記的 14C-次黃嘌呤在色譜測定中測試紅細胞裂解物中的 HPRT 酶功能 （Cartier， P. et al， 1968）。
原理：
通過追蹤 IMP 脫氫酶氧化的 IMP 的產(chǎn)生來測量 HPRT 活性。這個過程導致 NADH2 的形成，在 340 nm 處通過分光光度法連續(xù)監(jiān)測以進行實時測量。
檢測 6.75 nmol/h/ml 至 340 nmol/h/ml 的 HPRT 活性，能夠表征*全和部分缺陷。
測量不精確度：1.5%（運行內(nèi)）、5%（日間）和 6.5%（總計）。
在 2 小時內(nèi)同時分析多達 15 個樣品，一式三份。
無需樣品制備或事先滅活細胞 5'-核苷酸酶。細胞裂解物直接用于連續(xù)監(jiān)測 HPRT 活性。
通過 PRECICE® HPRT 檢測試劑盒測量的紅細胞、PBMC 和培養(yǎng)細胞裂解物中 HPRT 的比活性與先前通過放射化學程序獲得的活性相當。
| Cells | PRECICE® HPRT Assay Kit | Published Data | References |
|---|---|---|---|
| RBC specimen 1 (n=4) | 76.94±2.5 nmol/h/mg of Hgb | 80–120 nmol/h/mg of hemoglobin | 4 |
| RBC specimen 2 (n=12) | 78.03±5.52 nmol/h/mg of Hgb | ||
| RBC specimen 3 (n=4) | 88.7±3.41 nmol/h/mg of Hgb | ||
| PBMC specimen 1 (n=4) | 159.91±3.60 nmol/h/mg of protein 19.7±0.6 nmol/h/106 PBMC | 343±18 nmol/h/mg of protein 10.2–18.0 nmol/h/106 PBMC | 4 |
| PBMC specimen 2 (n=4) | 152.30±4.94 nmol/h/mg of protein 21.3±0.42 nmol/h/106 PBMC | 5 | |
| Human Dermal Fibroblasts (Invitrogen) | 70.91±2.67 nmol/h/mg of protein | 81–127 nmol/h/mg of protein | 6 |
| W20-17 cells (ATCC) | 91.95±4.49 nmol/h/mg of protein |
每小時 340 nm 處吸光度增加的速率與人重組 HPRT 酶濃度的函數(shù)關(guān)系（NovoCIB，參考文獻 E-Nov-9）。在*全反應混合物中稀釋至最終血紅蛋白濃度 1mg/ml （n=4） 的 3 種不同對照溶血物對應的吸光度變化由實心方塊、實心三角形和實心圓表示。插入片段顯示，在 21 ng/ml 至 1.5 μg/ml 的整個重組 HPRT 范圍內(nèi)觀察到線性相關(guān)性;單位相同。
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I. Romero-Carraminana, S. Dominguez-Zorita, P.B. Esparza-Molto, J. M. Cuezva (2024) iScience 27, 109863
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Z. Wu, D. Bezwada, F. Cai, J. Garcia-Bermudez, M. Ni, R.J. DeBerardinis, Cell Metab. 2024 Jun 7:S1550-4131(24)00190-6
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G. Jang , H. Rim Shin, H.-S. Do , J. Kweon , S. Hwang , S. Kim, S. Hee Heo, Y. Kim, B. Lee Molecular Therapy - Nucleic Acids ; 31: 586-595.
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V. Ruillier, J. Tournois, C. Boissart, M. Lasbareilles, G. Mahé, L. Chatrousse, M. Cailleret, M. Peschanski, A. Benchoua JCI Insight 5(4): e132094.
Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase and inosine 5'-monophosphate dehydrogenase activities in three mammalian species: aquatic (Mirounga angustirostris), semi-aquatic (Lontra longicaudis annectens) and terrestrial (2015)
M. Barjau Pérez-Milicua, T. Zenteno-Savín, D.E. Crocker, J.P. Gallo-Reynoso Front Physiol.; 6: 212.
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José Guadalupe So?anez-Organis, José Pablo Vázquez-Medina, Tania Zenteno-Savín, Andres Aguilar, Daniel E. Crocker, Rudy M. Ortiz J Exp Biol (2012) 215 (9): 1448-1455.
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