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膠體金凍干制品的制備方法示例說明

閱讀:3276      發(fā)布時間:2020-6-11
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免疫膠體金作為標記物用于免疫電鏡技術是一種新的免疫學方法。免疫膠體金技術(Immune colloidal gold technique) 是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術,英文縮寫為:GICT。膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,聚合成為特定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),稱為膠體金。膠體金顆粒對蛋白質有很強的吸附能力,可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、 毒素、糖蛋白、酶、激素、病毒或細菌抗原等非共價結合,形成免疫膠體 金綴合物,用于免疫檢測。

免疫膠體金常用的穩(wěn)定劑(保護劑)對免疫膠體金的穩(wěn)定性非常重要,國內外常應用的各 種穩(wěn)定劑:牛血清白蛋白(BSA)、葡聚糖(Dextran)、聚乙二醇20000(PEG)、 明膠(gelatin)。目前普遍使用聚乙二醇20000(PEG)作為穩(wěn)定劑。

免疫膠體金定性檢測因其快速、簡便,在醫(yī)院檢驗科已廣泛應用,用于妊娠早期診斷的人絨毛膜促性腺激素(HCG)膠體金法診斷試劑制造及檢定規(guī)程已由中國生物制品規(guī)程公布。免疫膠體金技術常用于定性檢測微生物感染、檢測血清抗體、檢測血清C-反應蛋白C RP等。

免疫膠體金技術快速又簡便,所以廣受歡迎,但要測定結果非常準確, 則免疫膠體金必須有好的穩(wěn)定性,這在免疫膠體金定量檢測中尤為重要, 是發(fā)展金標法快速定量檢測試劑的前提。

生物制品凍干形式可以采用常溫運輸和儲存,保存期長,大大降低低溫保存不當帶來的失效變性等,而且凍干后試劑穩(wěn)定性好。因此采用凍干法可以制備制備膠體金凍干品、化學發(fā)光凍干品、熒光PCR凍干品等。凍干法已經(jīng)在診斷試劑行業(yè)正在崛起。

那么凍干膠體金制品和凍干PCR試劑或者其他凍干其實都是相似的原理,主要步驟如下:

1.制備抗體包被膠體金

2.制備膠體金溶液:膠體金溶液包含了穩(wěn)定劑、保護劑、緩沖液等。膠體金溶液的配置是非常關鍵的,如果配置的保護劑選擇不當或者溶度不合適,可能在凍干過程中會發(fā)生破乳現(xiàn)象,嚴重的破乳會造成肉眼可見的顆粒凝聚。輕度的破乳引起的微量顆粒凝聚, 在檢測過程中因直徑增大而通不過微孔纖維膜,滯留在膜上的紅色凝聚顆 粒就誤報為假陽性的結果。

3.制備膠體金凍干品:制備凍干品的凍干工藝曲線可以優(yōu)化。在控制風險,獲得優(yōu)質凍干品的同時優(yōu)化工藝曲線,可以節(jié)省凍干時間,降低成本。

   所有的凍干制品的開發(fā)工藝基本上是一致的主要包含凍干配方篩選也就是保護劑的篩選,其次是凍干曲線工藝優(yōu)化。

 

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