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凍干人外周血細胞的方法、意義及應用

閱讀:71      發布時間:2025-5-7
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 人外周血細胞常溫或者通常情況下保存周期短,需要超低溫設備,使用時不方便,為了提高其應用價值開發了凍干型人外周血細胞凍干法。凍干型外周血細胞具有以下優點:

長期保存細胞:凍干技術可使外周血細胞處于休眠狀態,長期保存細胞活性和功能,在需要時快速復蘇用于研究或治療,如保存免疫細胞用于后續免疫療法研究。

• 方便運輸與共享:凍干后細胞便于運輸,減少特殊設備需求和運輸成本,利于不同實驗室和醫療機構間共享細胞資源,促進科研合作和臨床應用。

• 穩定細胞特性:能有效保持細胞的生物學特性,包括細胞表面標志物、細胞活性、細胞功能等,確保后續研究和應用的準確性。

• 應急儲備:在自然災害、戰爭等緊急情況下,作為細胞儲備,及時用于輸血、細胞治療等,保障醫療需求。

凍干型外周血細胞是采用真空冷凍干燥的方法進行除水干燥的,干燥后的樣品外凍干粉餅,保存在棕色避光型西林瓶中,使用時可以加水或者復溶劑快速復溶。

凍干外周血細胞的流程

  1. 細胞準備:收集外周血細胞,通過離心等方法去除雜質和血漿成分,得到純度較高的細胞懸液,調整細胞濃度至適宜范圍,如 1×10?-1×10? cells/mL

  2. 添加保護劑:將凍干保護劑按一定比例加入細胞懸液中,輕輕混勻,使細胞充分與保護劑混合均勻

  3. 預凍:將含有保護劑的細胞懸液放入低溫環境中預凍,如放入-80℃冰箱冷凍 2-4 小時或在液氮中快速冷凍,使細胞內的水分凍結,形成細小的冰晶,減少冰晶對細胞的損傷。

  4. 升華干燥:將預凍后的細胞放入凍干設備中,開啟真空泵,降低壓力,使冰晶在低溫低壓下直接升華為水蒸氣并被移除,此過程需要嚴格控制溫度和壓力,防止細胞過熱或過度干燥。

  5. 后處理:升華干燥完成后,繼續在真空或充入惰性氣體的環境下進行后處理,如進一步降低溫度,使殘余的水分凍結并升華,確保細胞充分干燥,最后密封保存。

凍干評價方法

• 細胞存活率測定:通過臺盼藍拒染法、CCK-8 法等檢測凍干復蘇后細胞的存活率,評估細胞的活性。

 

• 細胞活性檢測:采用流式細胞術檢測細胞的增殖能力、細胞周期分布等指標,了解細胞的功能狀態;還可通過檢測細胞內酶的活性等指標,評估細胞的代謝功能。

• 細胞功能評估:對于特定類型的免疫細胞,如 T 細胞、NK 細胞等,可檢測其分泌細胞因子的能力、殺傷活性等,以評估細胞的功能完整性。

• 細胞表面標志物檢測:利用流式細胞術檢測細胞表面特定標志物的表達情況,判斷細胞的類型和狀態是否發生改變。

未來應用

• 個性化醫療:根據患者的個體差異,凍干保存患者自身的外周血細胞,用于未來的個性化治療,如 CAR-T 細胞療法等,提高治療效果和安全性。

• 細胞治療:為細胞治療提供更穩定、可靠的細胞來源,如凍干的造血干細胞可用于治療血液系統疾病,凍干的免疫細胞可用于腫瘤的免疫治療等。

• 生物制藥:在生物制藥領域,凍干人外周血細胞可用于生產細胞來源的生物制品,如細胞因子、抗體等,提高生物制品的質量和穩定性。

• 基礎研究:為研究人體免疫系統、血液系統等提供便利,科研人員可隨時獲取凍干的外周血細胞進行實驗,深入研究細胞的生理功能、病理機制等。

 


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