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細胞密度儀器

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流式細胞儀(Flow cytometer )是對細胞進行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量,并可以根據預選的參量范圍把的細胞亞群從中分選出來。多數流式細胞計是一種零分辨率的儀器,它只能測量一個細胞的諸如總核酸量,總蛋白量等指標,而不能鑒別和測出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是說,它的細節 分辨率為零。
基本結構
組成
流式細胞儀主要由四部分組成。它們是:流動室和液流系統;激光源和光學系統;光電管和檢測系統;計算機和分析系統。上圖為其結構示意圖。
流動室和液流系統
流動室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成,常用光學玻璃、石英等透明、穩定的材料制作。設計和制作均很精細,是液流系統的心臟。樣品管貯放樣品,單個細胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射出;鞘液由鞘液管從四周流向噴孔,包圍在樣品外周后從噴嘴射出。為了保證液流是穩液,一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用,被檢測細胞被限制在液流的軸線上。流動室上裝有壓電晶體,受到振蕩信號可發生振動。
激光源和光學系統
經特異熒光染色的細胞需要合適的光源照射激發才能發出熒光供收集檢測。常用的光源有弧光燈和激光;激光器又以氬離子激光器為普遍,也有配和氪離子激光器或染料激光器。光源的選擇主要根據被激發物質的激發光譜而定。汞燈是常用的弧光燈,其發射光譜大部分集中于300~400nm,很適合需要用紫外光激發的場合。氬離子激光器的發射光譜中,綠光514nm和藍光488nm的譜線強,約占總光強的80%;氪離子激光器光譜多集中在可見光部分,以647nm較強。免疫學上使用的一些熒光染料激發光波長在550nm以上,可使用染料激光器。將有機染料做為激光器泵浦的一種成份,可使原激光器的光譜發生改變以適應需要即構成染料激光器。例如用氬離子激光器的綠光泵浦含有Rhodamine6G水溶液的染料激光器,則可得到550~650nm連續可調的激光,尤在590nm處轉換效率高,約可占到一半。為使細胞得到均勻照射,并提高分辨率,照射到細胞上的激光光斑直徑應和細胞直徑相近。因此需將激光光束經透鏡會聚。光斑直徑d可由下式確定:d=4λf/πD。λ為激光波長;f為透鏡焦距;D為激光束直徑。色散棱鏡用來選擇激光的波長,調整反射鏡的角度使調諧到所需要的波長λ。為了進一步使檢測的發射熒光更強,并提高熒光訊號的信噪比,在光路中還使用了多種濾片。帶阻或帶通濾片是有選擇性地使某一濾長區段的光線濾除或通過。例如使用525nm帶通濾片只允許FITC(Fluoresceinisothiocyanate,異硫氰熒光素)發射的525nm綠光通過。長波通過二向色性反射鏡只允許某一波長以上的光線通過而將此波長以下的另一特定波長的光線反射。在免疫分析中常要同時探測兩種以上的波長的熒光信號,就采用二向色性反射鏡,或二向色性分光器,來有效地將各種熒光分開。

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