產(chǎn)品規(guī)格 （CAT#: DL2050）

BW25113:                                                    100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                     10μl

保存條件（保質(zhì)期）：                         -80℃（6個(gè)月）

基因型

F-, DE(araD-araB)567, lacZ4787(del)::rrnB-3, LAM-, rph-1, DE(rhaD-rhaB)568, hsdR514

產(chǎn)品說明

BW25113菌株來源于E. coli K-12 W1485，是K12的衍生菌株，與MG1655類似，也是一種經(jīng)過較少改造，比較接近于“野生型”的大腸桿菌工程菌株。BW25113作為母系菌株，可以用來制作E. coli Keio Knockout 文庫；同時(shí)可作為大腸桿菌模式菌株使用，用來制作各種基因的Knockout突變體。另外，BW25113可用于構(gòu)建，擴(kuò)繁質(zhì)粒使用，不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶，以防提取的質(zhì)粒被降解。pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>0.5×10⁹ cfu/μg DNA。

操作方法

1. BW25113感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。