XL1-Blue MRF` Kan:                                      100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                       10μl

保存條件（保質期）：                           -80℃（6個月）

基因型

?(mcrA)183 ?(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F´proAB lacIqZ?M15 Tn5 (Kan^R)]

產品說明

XL1-Blue MRF’Kan菌株來源于XL1-Blue株系，是限制酶系統缺失型[?(mcrA)183, ?(mcrCB-hsdSMR -mrr)173],，且具有卡那霉素抗性 (Kan^R)，可轉化具有氯霉素或四環素抗性的質粒。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。hsdR17突變導致EcoK核酸內切酶系統缺失，增強了外源DNA的穩定性和提取質量。 lacI^qZΔM15 的存在使XL1-Blue MRF’Kan菌株可用于藍、白斑篩選。XL1-Blue MRF’Kan感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. XL1-Blue MRF’Kan感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA并用手打EP管底充分混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或

LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項

1. 感受態細胞好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. XL1-Blue MRF’Kan感受態細胞具有卡那霉素抗性，不可轉化具有卡那霉素抗性的質粒。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。