JM109：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (r_k^-,m_k⁺) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI ^qZΔM15]

產品說明

JM109菌株來源于E.coli K strain，是提取高質量DNA的理想菌株，recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。攜帶hsdR17基因型背景，使得異源DNA不被內源核酸酶系統降解。laqI ^qZΔM15的存在使JM109可用于構建克隆，藍白斑篩選實驗；JM109感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率可達10⁹cfu/μg DNA。 

操作方法

1. JM109感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質粒或連接產物) 并用手打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項

1. 感受態細胞好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量