DB3.1：                                                      100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

F- gyrA462 endA1 glnV44 Δ(sr1-recA) mcrB mrr hsdS20(r_B^-, m_B^-) ara14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (Sm^R) xyl5 Δleu mtl1

產品說明

DB3.1大腸桿菌菌株基因組中含有gyrA462基因，賦予其對ccdB毒性基因的抗性，特別適用于構建或擴繁含有ccdB基因的質粒載體 (例GATEWAY System vector)，此菌株具有鏈霉素抗性。DB3.1感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19檢測轉化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. DB3.1感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應

抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項

1. 感受態細胞好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入目的DNA時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。