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詳細介紹
Ar.Qual Electro： 50μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl )： 10μl
保存條件(保質期)： -80℃（12個月）
基因型
Agrobacterium rhizogenes (strR,CamR ) Ar Qual Ri (agropine type)
產品說明
發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感染
大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.Qual發根農桿菌菌株含有農桿堿型Ri質粒，具有
廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，番茄，柑橘等），同時具有鏈霉素，氯霉素抗性。唯地生物開發的Ar.Qual發
根農桿菌電轉感受態特別適用于大質粒的轉化：經pCAMBIA2301質粒 (size:11633 bp)檢測轉化效率>105
cfu/μg DNA；經pCAMBIA2301-ZH質粒（size:40 kb）檢測轉化效率可達5×103 cfu/μg DNA。
常規操作方法
1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分
揮發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分
降溫。
2. 取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中5分鐘，待其融化，加入0.01-1 μg質粒DNA（體積不大于6ul，好用
試劑盒抽提，雙蒸水溶解；轉化效率較高，一次使用前好做預實驗確定所加質粒的量），用手打管底混勻
，立即插入冰中，用200 μl槍頭將感受態-質粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。
3. 啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數為Biorad 推薦，使用者也可按所用電
轉儀推薦的protocol操作），將電擊杯從冰中拿出，吸水紙吸干外表面水份，快速放入電轉槽中，啟動電擊，電
擊完成快速插入冰中，加入1 ml無抗生素的TY，并轉移到感受態空管中，28℃振蕩培養2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的TY平板上，倒置放于
28℃培養箱培養2-3天
● 農桿菌相關抗生素配方：
抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
羧芐青霉素 (carb) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
硫酸卡那霉素 (kan) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
鏈霉素 (strep) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
利福平 (rif) | DMSO溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
慶大霉素 (gent) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
氯霉素（cam） | 無水乙醇溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 34 mg/ml | 34 ug/ml |
常用農桿菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
農桿菌菌株 | 羧芐青霉素(carb) | 鏈霉素(strep) | 利福平(rif) | 氯霉素(cam) | 硫酸卡那霉素(kan) |
Ar A4 | S | S | S | S | R |
MSU440 | S | R | S | S | S |
Ar Qual | S | R | S | R | S |
● TY配方（1L）：
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
補水到1L體積，*溶解后，121度、20分鐘高溫滅菌
配制1M的氯化鈣水溶液，121度、20分鐘高溫滅菌
每1L 滅菌的TY液體營養液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。
若配制TY固體培養基，則加入15g 瓊脂粉。
注意事項
1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
2. 電轉感受態細胞中不可混入氣泡，轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量或最終用于涂板的菌量。
4. Ar.Qual具有鏈霉素、氯霉素抗性，不可用于具有鏈霉素抗性或氯霉素抗性質粒的轉化
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