一．產品簡介

1、產品名稱：人肺癌腫瘤成纖維永生化細胞

2、組織來源：肺癌組織

3、產品規格：25cm2培養瓶/5×105cells

4、細胞簡介：

人肺癌組織源細胞分離自患有肺癌組織的病人；肺癌是起源于肺部支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤，發病率和死亡率增長最快，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。

本公司生產的永生化人肺癌組織源細胞采用酶液消化法、離心純化和SV40T制備而來，細胞總量約為5×105cells，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

5、培養基信息：

培養基內容：基礎培養基、FBS、Penicillin、Streptomycin等；

為保證細胞體外培養最佳狀態我們推薦使用永生化人肺癌組織源細胞專用培養基作為體外培養永生化人肺癌組織源細胞專用培養基。

細胞發貨及鑒定圖片

細胞狀態照片：細胞發貨時發送至少3張細胞發貨前白光電子照片；

細胞鑒定照片：提供一套細胞鑒定圖片（可用于發文章）；若要用于文章多套使用，需額外增加鑒定費用，提供3套鑒定圖片；

使用方法

在技術部標準操作流程下，人肺癌組織源細胞可傳15-20代左右；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

一、客戶收到細胞操作如下

取出25cm2培養瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態；

觀察細胞生長情況，細胞密度低于80%時，貼壁細胞倒去瓶中培養液，留下8ml作用繼續培養；細胞密度大于80%時，即可進行傳代；

吸出25cm2培養瓶中的培養基，用PBS洗滌3次；

添加0.25%ydbm消化液約1ml至培養瓶中，37℃溫浴2-3min左右；倒置顯微鏡下觀察細胞回縮變圓，透亮時即可終止消化，加入雙倍培養液輕輕吹打細胞使其變成單細胞懸液；

收集細胞懸液至離心管內，1000rpm離心5min，觀察細胞沉淀；

加入1ml的培養液，輕輕吹打成單細胞懸液，均勻分配至細胞培養瓶中，初次傳代建議按照1：2比例進行

待細胞貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的培養基。

二、細胞凍存管復蘇

提前室溫預熱培養基，將水浴鍋調至37℃；

在超凈工作臺內提前準備好15ml離心管，并加入5ml的培養基；

將凍存管快速放入水浴鍋中，不斷晃動凍存管，直至管內冰塊全部融化

然后快速取出，噴灑酒精，轉移至超凈工作臺；

擰開凍存管螺紋蓋，用移液槍將細胞懸液輕輕吸出，轉移至含5ml培養基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

離心結束后，觀察有無細胞沉淀，將上清棄去，加入1ml新鮮的培養基，用移液槍輕輕吹打成細胞懸液；將細胞懸液轉移至T25培養瓶中，T25培養瓶建議培養基加入量5-7ml，輕輕晃動培養瓶使細胞分散均勻，置于培養箱中培養。

細胞凍存

凍存條件：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO或者無血清凍存液

保存條件：液氮存儲

四、注意事項

培養基于4℃條件下可保存3-6個月；

細胞收到操作注意事項，請參考《細胞操作指導》

由于使用所用試劑、操作環境、操作手法不同，以上僅供各實驗室參考！