詳細介紹
細胞鑒定:種屬鑒定已通過
細胞來源:國家資源庫
細胞背景:C Khanna1998年建立,是合適的腫瘤模型。在 BALB/c 小鼠中形成腫瘤,并在超過 90% 的接種小鼠中自發轉移到肺部。CD31 + Ref+。分泌型磷蛋白 1(骨橋蛋白)因子 VIII;整合素結合唾液蛋白 (BSP); 比利亞安; 裝飾素;小人 2 (ezrin) 。骨唾液蛋白、biglyan、decorrin 和骨橋蛋白的表達提示骨譜系細胞。
細胞特性:
1) 來源:BALB/c 器官: 骨 疾病: 骨肉瘤 來源轉移灶: 肺 細胞類型: 成骨細胞;
2) 形態:成骨細胞 貼壁生長
用途:僅供科研使用
培養條件
:1) 準備DMEM培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
注意事項:該細胞為穩定轉染的細胞,隨細胞傳代次數的增加,其熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養基維持培養,若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養基繼續篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養基培養,至細胞密度約80%,可繼續加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥培養基正常培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)ydbm-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用