詳細介紹
細胞背景
來源于 C57BL/6J 小鼠的原發性肝細胞癌。這些小鼠肝細胞忠實地代表了肝細胞癌,并為研究這種類型的肝癌提供了有價值的模型。同義詞 HEP-53.4 和 53.4,它們便于識別和交叉引用。肝細胞癌是一個重大的健康問題,這些細胞能夠對其分子通路、細胞相互作用和治療策略進行精確研究。這些細胞起源于 Mus musculus(小鼠),為理解和開發肝細胞癌的治療方法提供了相關的模型系統。
細胞特性
形態:上皮樣細胞 貼壁生長.
用途:僅供科研使用。
培養條件:
1)準備 DMEM(含 NaHCO3 1.5g/L)+FBS 10% + P/S 1 %
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37 攝氏度,培養箱濕度為 70%-80%
注意:該細胞在 DMEM(含 1.5g/LNaHCO3)培養基中生長良好,大部分品牌的 DMEM 含有較高濃度的 NaHCO3(3.7g/L),若使用 DMEM(3.7g/L NaHCO3)培養基培養細胞時需要提高 CO2 濃度(7%-10%)。
1.常規消化收集細胞離心 2.離心后去掉離心管內上清,加入 1ml 左右ym重懸細胞混勻,建議輕輕晃動或者輕輕吹打細胞, 放入培養箱消化細胞,再消化 1min 左右。 3. 消化好后,用移液槍輕輕吹打細胞懸液,使細胞團分散,迅速加入 3-5ml 含血清的培養基混勻以終止消化,離心去除ym 4. 加入 5ml 左右的細胞相應的培養基混勻,按比例接入培養瓶/皿中 5.顯微鏡下觀察看細胞是否成均勻分散的單細胞,若有少量成團的小細胞團可不用重新消化,使之貼壁后待細胞生長穩定后再消散細胞。
貼壁細胞參考:
一.消毒靜置等細胞穩定后拍照 100X 和 200X。棄去培養上清,用 PBS 潤洗細胞 1-2 次并吸走。
二. T25 瓶加入 0.25%EDTA ydbm 1-2ml 于培養瓶中震蕩混勻,如果屬于貼壁不牢固的細胞很容易脫落的就培養箱外面消化震蕩待脫落 90%以上終止消化,一般小于 1 分鐘以內,甚至不加ym有部分貼壁非常不牢固的細胞也會自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細胞則置于 37℃培養箱中消化提高效率,每 40-50 秒拿出培養箱震蕩幫助細胞脫落,如脫落 90%以上則對應 3-6ml 含有 10%血清的培養基終止,以防ym殘留損傷細胞。如
果貼壁非常牢固的細胞,脫落的比例比較低,也不超過 2 分鐘后終止消化,再加入 1ml 培養基讓細胞緩沖后再過 2 分鐘進行二次消化,反復分步消化以降低單次消化時長,減少刺激,保護細胞膜。或采用刮產刮細胞的方式處理也可以。總歸原則是達到消化目的的同時減少細胞膜受到的損傷越小越好。
三.消化完成后輕輕吹勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 3-5min,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。將細胞懸液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養皿中,添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按 1:2 和以上比例進行,具體以實際細胞密度決定。期間多的細胞一定保存多份細胞凍存管備種