詳細介紹
產品簡介
XL-10-Gold 是目前轉化效率高的感受態細胞,可用于大質粒或珍貴連接產物轉化或構建文庫。XL-10-
Gold 菌株為 Hte (high transformation efficiency)基因型,是可特異性提高感受態轉化效率及大質粒轉化能力
的宿主菌基因型,已成功應用于 40 kb 質粒的構建。XL-10-Gold 幾乎缺失了所有已知的限制酶切系統,同時缺
失了核酸內切酶(endA),因此可以提高質粒 DNA 的產量和質量。同時,重組酶缺陷型(recA)減少了插入片段的
同源重組概率,保證了質粒的穩定性。菌株帶有四環素和氯m素抗性,并可用于藍、白斑篩選
實驗。經 pUC19 質粒轉化檢測,XL-10-Gold 感受態細胞的轉化效率可達 108 cfu/μg DNA 以上。
產品組成
存儲條件
-80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
無外源質粒 DNA 殘留;
化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90 s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基(室溫或 37 ℃預熱),然后置于 37 ℃搖床復壯 45 min;
5. 取不同體積的轉化產物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養箱培養過夜。
注意事項
1. 感受態細胞冰浴中解凍后應立即使用;
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10;
3. 加入待轉化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態細胞,僅用手指輕彈即可;
4. 為確保優良轉化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔