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詳細介紹
產品簡介
Rosetta-gami B 系列菌株來源于 Origami B 系列菌株，是集合了 BL21 系列、Rosetta 系列菌株和
Origami 系列菌株的優點。該系列菌株攜帶有 trxB 和 gor 基因突變，可以高效表達含二硫鍵的蛋白；
此外，由于能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個稀有
密碼子的 tRNA，因而能夠提高真核蛋白在大腸桿菌中的表達水平。該菌株含有氯m素、卡那和四
環素抗性，所以無法轉化含這些抗性的質粒，但是可以用于氨芐抗性和壯觀m素抗性質粒的原核
表達。Rosetta-gami B(DE3) pLysS 可高效表達 T7 RNA 聚合酶，因而適用于 pET 系列載體及其他 T7
啟動子系列載體。含有的 pLysSRARE 質粒可以表達 T7 溶j酶來有效降低目的基因的本底表達水
平。pLysSRARE 質粒的起始復制位點是 p15 Origin，其可以與 pUC-及 pBR322-衍生的質粒互相共
存。經 pUC18 質粒轉化檢測，Rosetta-gami B (DE3) pLysS 感受態細胞的轉化效率可達 107 cfu/μg
DNA 以上。
產品組成
組分
Rosetta-gami B (DE3) pLysS
化學感受態細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F– ompT hsdSB (rB– mB–) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pLysSRARE (CamR, KanR, TetR)
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除 pLysSRARE 質粒外，無外源質粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基（室溫或 37 ℃預熱），后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉化產物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養箱培養過夜。
注意事項
1. 感受態細胞冰浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優良轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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