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詳細介紹
產品簡介
Rosetta-gami B 系列菌株來源于 Origami B 系列菌株，是集合了 BL21 系列、Rosetta 系列菌株和
Origami 系列菌株的優點，極大的增強了細胞內二硫鍵的形成和含有在大腸桿菌中稀有密碼子的真
核細胞蛋白的表達能力。本菌株含有 pRARE 質粒，能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有的 AUA,
AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個稀有密碼子的 tRNA，增加了真核細胞的在大腸桿菌中的蛋白
表達水平。在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase (gor)基因上同時含有突變，這使得
該菌株能夠更加高效地在細胞質內生成二硫鍵，有助于表達含二硫鍵的活性蛋白。pRARE 質粒帶
有氯m素抗性，同時基因 trxB 和 gor 的突變使得該菌株具備了卡那和四環素抗性，所以本菌株無法
用于含氯m素、卡那和四環素抗性質粒的蛋白表達。Rosetta-gami B(DE3)系列菌株是來源于
Origami B 系列菌株，其中 DE3 是溶源性的 λDE3, 所以帶有 T7 RNA 聚合酶的染色體拷貝。該菌株
適用于 pET 系列載體，及其他 T7 啟動子系列載體。經 pUC18 質粒轉化檢測，Rosetta-gami B(DE3)
感受態細胞的轉化效率可達 108 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
Rosetta-gami B(DE3)
化學感受態細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F– ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR, KanR, TetR)
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除 pRARE 質粒外，無外源質粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基（室溫或 37 ℃預熱），后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉化產物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養箱培養過夜。
注意事項
1. 感受態細胞冰浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優良轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
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