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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡介
Rosetta-gami 2 系列菌株是集合了 Rosetta 2 系列菌株和 Origami 2 系列菌株的優(yōu)點(diǎn)；Rosetta-gami 2
(DE3)系列菌株是來源于 Origami 2，帶有溶源性的 λDE3，可表達(dá) T7 RNA 聚合酶。該菌株攜帶有
trxB 和 gor 基因突變，從而提高了含二硫鍵正確折疊蛋白的表達(dá)效率。該菌株中帶有的
pLysSRARE2 質(zhì)粒（攜帶氯m素抗性），除了能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG,
AGA, CUA, CCC, 和 GGA六個(gè)稀有密碼子的 tRNA外，還提供了第七個(gè)稀有密碼子 CGG 的 tRNA，
因而能夠提高真核蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)水平。Rosetta-gami 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞具有四環(huán)素抗性，
不含卡納抗性，適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟動(dòng)子系列載體。pLysSRARE2 質(zhì)粒可表達(dá) T7 溶菌
m，可以有效降低目的基因的基礎(chǔ)表達(dá)水平。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測，Rosetta-gami 2 (DE3) pLysS
感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107 cfu/μg DNA 以上。
產(chǎn)品組成
組分
Rosetta-gami 2 (DE3) pLysS
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 ×100 μL
定制
基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10
trxB pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR)
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除 pLysSRARE2 質(zhì)粒外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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