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Rosetta (DE3)pLysS 感受態(tài)

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  • 型號 CC96112
  • 品牌 其他品牌
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市

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更新時間:2024-11-01 15:31:42瀏覽次數:107

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產品簡介

Rosetta 系列菌株來源于 BL21 系列宿主菌,該系列菌株含有原本在大腸桿菌中稀少的真核細胞密碼
子,增加了真核細胞的蛋白表達水平。Rosetta(DE3)pLysS 來源于 Rosetta(DE3),菌株能夠提供
AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 稀有密碼子的 tRNA。Rosetta(DE3)pLysS 載體通過提供稀有
密碼子,使得該宿主菌相對于其他大腸桿菌

詳細介紹

產品簡介
Rosetta 系列菌株來源于 BL21 系列宿主菌,該系列菌株含有原本在大腸桿菌中稀少的真核細胞密碼
子,增加了真核細胞的蛋白表達水平。Rosetta(DE3)pLysS 來源于 Rosetta(DE3),菌株能夠提供
AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 稀有密碼子的 tRNARosetta(DE3)pLysS 載體通過提供稀有
密碼子,使得該宿主菌相對于其他大腸桿菌,能夠提供更加通用"的蛋白質表達,從而提升目的蛋
白表達水平。DE3 是溶源性的 λDE3, 所以帶有 T7 RNA 聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于 pET 
列載體,及其他 T7 啟動子系列載體。含有 pLysSRARE2 質粒,能夠產生 T7 溶菌m,可以有效降低
目的基因的基礎表達水平,該質粒具有氯m素抗性。pLysSRARE2質粒的起始復制位點是p15 Origin,
這使得該質粒能夠和 pUC-及 pBR322-衍生的質粒互相共存。經 pUC18 質粒轉化檢測,
Rosetta(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞的轉化效率可達 10cfu/μg DNA 以上。
產品組成
組分
Rosetta(DE3)pLysS
化學感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:FompT hsdSB (rB-mB-gal dcm (DE3) pLysSRARE2 (CamR)
存儲條件
-80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除 pLysSRARE2 外,無外源質粒 DNA 殘留;
化學法轉化效率≥10cfu/μg pUC18 DNA
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90 s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min
4. 向離心管中加入900 μL LBSOC培養(yǎng)基(室溫或37 ℃預熱)然后置于37 ℃搖床復壯45 min
5. 取不同體積的轉化產物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應立即使用;
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10
3. 加入待轉化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞,僅用手指輕彈即可;
4. 為確保優(yōu)良轉化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。


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