GV3101 感受態細胞介紹：

C58(rifR)TipMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR)Nopaline  

GV3101 感受態細胞產品說明：  

GV3101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pMP90(pTiC58DT-DNA)，此質粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90(pTiC58DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti質粒含有篩選標簽：gent，賦予GV3101菌株慶大霉素抗性，適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作，本公司生產的GV3101化學轉化感受態細胞經特殊工藝制作，pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率>104cfu/μgDNA。  

操作方法：  

1.取-80℃保存的農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態時插入冰中。  

2.每100μl感受態加入0.01-1μg質粒DNA（轉化效率較高，次使用前做預實驗確定所加質粒的量），用手管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。  

3.加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養基，于28℃振蕩培養2~3小時。  

4.6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天。  

（當平板只含有50μg/mlkan時，28℃培養48h即可；平板中同時加入50μg/mlkan，20μg/mlrif時，需28℃培養60h；如果使用的平板含有50μg/mlrif則需要28℃培養72-90h）。  

注意事項：

1.加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。  

2.混入質粒時應輕柔操作。轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。  

3.平板上陽性克隆密度過大時，由于營養不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量。  

4.利福平濃度不應高于25μg/ml，過高的利福平濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態計算轉化效率時所用平板只含有50μg/mlkan，若所用平板含有20μg/mlrif則轉化效率降低到1/2。  

5.培養基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌；根據所用菌株抗性加入Ti質粒篩選抗生素可防止Ti質粒丟失，但Ti質粒篩選抗生素不利于農桿菌的轉基因操作，所以一般培養農桿菌時不考慮這些抗生素，Ti質粒丟失的概率極低(可以忽略)。  

備注：  

1、農桿菌相關抗生素配方：

2、常用農桿菌抗性：（R：抗；S：敏感。）

3、LB及YEB配方：

10種農桿菌化學轉化感受態產品僅需冰、液氮和37℃ 熱激操作即可，實驗簡單方便，經pCAMBIA2301 (11.6 Kb)質粒檢測轉化效率可達1×104 cfu/μg。同時提供7種農桿菌電擊感受態產品，可成功轉化大于50 Kb的載體，經pCAMBIA2301 (11.6 Kb)質粒檢測轉化效率可達1×105 cfu/μg。