BL21(DE3) 大腸桿菌表產品信息：  
組成                          BC201-01                       BC201-02  
BL21(DE3) Competent cells                    10×100µl                         20×100µl  
pUC19（0.1ng/µl）                 5µl                              5µl  
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融  
產品介紹：  
本公司生產的 BL21(DE3)感受態細胞是采用大腸桿菌 BL21(DE3)菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，  
可用于 DNA 的化學轉化。使用 pUC19 質粒檢測，轉化效率可達 10 7 cfu/µg，-70℃保存幾個月轉化效率不發生  
改變。每支感受態可以酌情分裝使用，降低了實驗的成本。質量穩定，使用方便，質優價廉。  
基因型：

F-ompT hsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)。
BL21(DE3) 大腸桿菌產品特點：  

該感受態細胞用于以 T7 RNA 聚合酶為表達系統的高效外源基因的蛋白表達宿主。T7 噬菌體 RNA 聚合酶基因的表達受控于λ噬菌體 DE3 區的 lacUV5 啟動子，該區域整合于 BL21 的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達。   

操作步驟（以下操作均按無菌條件的標準進行）：   

提示：   

感受態細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態細胞的轉化效率。   

進行轉化操作時，應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。   

為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到。   

1. 取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。   

（一次轉化感受態細胞的建議用量為 50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。應注意所用 DNA 體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。）以下實驗以 100μl 感受態細胞為例。   

2. 向感受態細胞懸液中加入目的 DNA，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置 30 分鐘。   

3. 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒鐘，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻 2 分鐘，該過程不要搖動離心管。（此步驟也可將離心管置于室溫進行，時間不需十分準確，夏季或室溫較高時，可放置5-8 分鐘左右；如果室溫較低，可延長時間至 8-15 分鐘左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法。）   

4. 向每個離心管中加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養基（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 150rpm，搖床振蕩培養 60 分鐘，目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。   

5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應抗生素的 LB 固體培養基平板上，用無菌的細菌涂布器或玻璃珠將細胞均勻涂開。等平板中的液體吸收后，倒置平板，37℃培養 12-16 小時。（涂布用量可根據具體實驗來調整。轉化質粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；連接產物的轉化菌液建議離心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。）   

6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。   

相關試劑及培養基的制備方法：   

1. LB 液體培養基：稱取 10g Tryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 燒杯中。加入約 800ml 的去離子水，溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液調節 pH 值至 7.0。加去離子水定容至 1L。分裝后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。   

2. SOB 和 SOC 培養基：稱取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的去離子水，溶解后再補加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（約 0.2ml）調 pH 至 7.0。加入去離子水將培養基定容至 1L。121℃滅菌 20 分鐘。使用時加入 5ml 滅菌的 2M MgCl2溶液（此種培養基稱為 SOB）。再補加經 0.22µm 過濾除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此種培養基為 SOC）。   

3. 轉化復蘇細菌用的液體 LB 培養基或 SOC 培養基：可以一次高壓 50ml 液體培養基，無菌狀態按 1ml每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中，裝于自封袋中，凍存于-20℃中，每次用一支。可以極大地避免培養基污染和減少勞動量。   

4. LB 固體選擇培養基：100ml LB 液體培養基中加入1.5g 瓊脂粉，搖勻后，121℃高壓滅菌20分鐘。冷 卻50℃左右時加入相應濃度的抗生素（如 AMP 濃度通常為 100µg/ml），混勻后倒在細菌用的無菌培養皿中，等瓊脂凝固后即可使用。   

5. IPTG：稱量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于40ml 滅菌水，濃度為 200mmol/L。用無菌0.22μm過濾膜過濾除菌。小份分裝后，-20℃保存。   

6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分裝（1ml/份）后，-20℃避光保存。