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原代細胞是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養的
細胞,稱為原代細胞。
-般認為,培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。在人工條件下使其原代細胞生存、生長、繁殖和傳
代,進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞I程等問題的研究。
那么關于原代細胞的傳代培養,我們應該怎么做呢?一般有以下兩種方法:
一、貼壁細胞的消化法傳代
1、吸除或倒掉瓶內舊培養液。
2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動培養瓶,使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分鐘后把培養瓶放置在顯微鏡下進行觀察,發現原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時,棄去消化液,加入培養液終止消
化。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸波,分別接種到另外兩到三個培養瓶中,置37°C培養箱中繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細胞的傳代
1、直接傳代
①讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3.
②用吸管吹打形成細胞懸液后,分別接種到另外兩到三個培養瓶中，置37*C培養箱中培養。
2、離心法傳代
①將細胞連同培養液一并轉移到離心管內 ,離心800-1000rpm , 5分鐘。
②去除上清,加新的培養液到離心管內,用吸管吹打使之形成細胞懸液。
③將細胞懸液分別接種到另外兩到三個培養瓶中,置37*C培養箱中培養。