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淺析熒光抗體技術(shù)檢測基本原理
某些熒光物質(zhì)在一定條件下，羊源性成分核酸檢測PCR-熒光探針試劑盒既能與抗原或抗體結(jié)合。又不影響抗原與抗體的特異性結(jié)合。用熒光抗原或熒光抗體對(duì)待檢標(biāo)本染色后，在熒光顯微鏡下觀察，可看到發(fā)出熒光的抗原抗體復(fù)合物。作為蛋白質(zhì)標(biāo)記用的熒光物質(zhì)需具備如下條件：①有與蛋白質(zhì)分子形成穩(wěn)定共價(jià)鍵的化學(xué)基團(tuán)，但不形成有害產(chǎn)物；②熒光效率高，與蛋白質(zhì)結(jié)合的需要量少；③結(jié)合物在一般條件下穩(wěn)定，結(jié)合后又不影響免疫活性；④作為組織學(xué)標(biāo)記，結(jié)合物的熒光必須與組織的自發(fā)熒光有良好的反襯；⑤結(jié)合程序簡單，能制成直接應(yīng)用的商品。滿足這些要求的熒光物質(zhì)有硫氰酸熒光素(FITC)、四乙基羅丹明(RB20())和四異甲基羅丹明(TMRITC)等，其中應(yīng)用較廣的是異硫氰酸熒光素。熒光抗體(抗原)染色法有以下幾類：
1．羊源性成分核酸檢測PCR-熒光探針試劑盒直接法 直接滴加2～4個(gè)單位的標(biāo)記抗體于標(biāo)本區(qū)，置試盒中．于37℃染色30min，然后置大量pH7．O～7．2的磷酸緩沖液(PBS)中漂洗15min，干燥，封載即可鏡檢。
2．雙層法標(biāo)本先滴加朱標(biāo)記的抗血清，置濕盒內(nèi)。37℃30min。漂洗后，再用標(biāo)記的抗抗體染色37℃30min．漂洗、干燥、封載。
3．夾層法本法主要用于檢測組織中的Ig。標(biāo)本先用相應(yīng)的可溶性抗原處理，漂洗后再用與該檢Ig有共同特異性標(biāo)記抗體染色。
4．熒光抗體抗補(bǔ)體染色法用熒光標(biāo)記抗補(bǔ)體抗體，即可用以示蹤能進(jìn)行補(bǔ)體結(jié)合的任何抗原抗體系統(tǒng)。將已滅活的抗血清與1：10稀釋血清混合，滴加于標(biāo)本上，37℃30～60min，漂洗后，羊源性成分核酸檢測PCR-熒光探針試劑盒再用抗補(bǔ)體染色37℃30min，漂洗、干燥、封載、鏡檢。