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細(xì)胞介紹

人食管癌細(xì)胞 (Eca-109)：1973 年建系，來自人食管中段鱗癌組織，小塊法原代培養(yǎng)建系。BALB/c 裸鼠移植成瘤。

細(xì)胞特性

1）  來源：食管癌

2）  形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4）  污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5）  規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

運輸和保存：

使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的 2ml 凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后， 可在 1000RPM，常溫條件下，離心 5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至 10cm 培養(yǎng)皿或者 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備 RPMI-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號 21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎

牛血清，10%。

2）  培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。

3）  凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。二． 細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）  細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1.  棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2.  加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.  按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4

分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4.  將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約 1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加 10%DMSO 后進(jìn)行凍存。

注意事項：

1.    收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2.    所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。