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超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測試劑盒
可見分光光度法
注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
規格：50T/24S
產品內容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存，用時加 27mL 蒸餾水配制成懸濁液，使用前充分搖勻； 試劑三：液體 160μL×1 支，4℃保存；
試劑四：液體 11mL×1 瓶，4℃保存。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
產品說明：
SOD（EC 1.15.1.1）是一種廣泛存在于生物體內的金屬酶，是重要的氧自由基清除劑，能催化超氧化物陰離子發生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統中具有重要作用。
通過黃-嘌呤及黃-嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-)，O2-可還原氮藍四唑生成藍色甲臜， 后者在 560nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-，從而抑制了甲臜的形成；反應液藍色越深，說明 SOD 活性愈低，反之活性越高。
操作步驟：
一、樣品的前處理：
1. 細菌或培養細胞：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清，按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（mL）為 500-1000:1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積（mL）為 1:5-10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入
1mL 提取液），進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
3. 血清（漿）樣品：直接檢測。二、測定步驟：
1. 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 560nm，蒸餾水調零。
2. 測定前將試劑一、二和四 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 5min 以上。
3. 樣本測定（在 EP 管中加入下列試劑）
4.
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 空白管 1 | 空白管 2 |
試劑一（μL） | 240 | 240 | 240 | 240 |
試劑二（μL） | 510 | 510 | 510 | 510 |
試劑四（μL） | 180 | 180 | 180 | 180 |
樣 品 （μL） | 90 | 90 | ||
蒸餾水（μL） | 6 | 90 | 96 | |
試劑三（μL） | 6 | 6 |
充分混勻，室溫靜置 30min 后，加入 1mL 玻璃比色皿，560nm 處測定各管吸光值 A。ΔA 測定
=A 測定-A 對照，ΔA 空白=A 空 1-A 空 2。注意：
1、試劑二為懸濁液，注意混勻后加入。試劑三為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、樣本較多時，可按表格配置工作液（包含試劑一、二、四），試劑三必須最后加入。
3、空白管 1 和空白管 2 各只需做 1~2 管；每個樣本有一個對照管。
4、反應完成后，可能有沉淀生成，混勻后測定即可。三、SOD 活性計算：
1、 抑制百分率的計算
抑制百分率＝( ΔA 空白－ΔA 測定) ÷ΔA 空白× 100%
盡量使樣品的抑制百分率在 30-70%范圍內，越靠近 50%越準確。如果計算出來的抑制百分率小于 30%或大于 70%，則通常需要調整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度比較高的待測樣品。
2、 SOD 酶活性單位：在上述黃-嘌呤氧化酶藕聯反應體系中抑制百分率為 50%時，反應體系中的 SOD 酶活力定義為一個酶活力單位。
3、 SOD 酶活性計算：
（1） 血清（漿）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V 反總]÷V 樣×樣本稀釋倍數
=11.4×抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×樣本稀釋倍數
（2） 組織、細菌或培養細胞 SOD 活力計算：
A 按樣本蛋白濃度計算
SOD 活性(U/mg prot)=〔抑制百分率÷（1－抑制百分率）×V 反總〕÷（V 樣×Cpr）×樣本稀釋倍數
=11.4×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ÷Cpr×樣本稀釋倍數B 按樣本鮮重計算
SOD 活性(U/g 鮮重)=〔抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V 反總〕÷(W×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋倍數
=11.4×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ÷W×樣本稀釋倍數C 按細菌或細胞個數計算
SOD 活力(U/104 cell)=〔抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總〕÷(500×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋倍數
=0.0228×抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×樣本稀釋倍數
V 反總：反應體系總體積，1.026mL；V 樣：加入反應體系中樣本的體積，0.09mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；500：細胞或細菌總數， 500 萬。
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