關于細胞培養瓶的相關知識
閱讀:581 發布時間:2023-6-7
一、細胞的附著和生長
在人工附著物上,大多數離體培養的脊椎動物細胞呈單層生長,因此,附著物必須帶有適合細胞附著或至少適合附著因子吸附的合適電荷,附著因子可促進細胞的附著和鋪展。雖然造血細胞系、嚙齒動物的腹水瘤細胞和少數其他選擇細胞系,如人小細胞肺癌(Carne et al.,1981)可在懸浮條件下自發生長;但許多轉化細胞系也可以使它們能在懸浮條件下生長,因此,它們的生長并不依賴附著物的表面電荷。然而,大多數正常細胞增殖前,需要在附著物上鋪展 ,附著不好或過度密集造成鋪展不充分時,可抑制細胞增殖。需要附著才能生長的細胞被稱為貼壁依賴性(achorage dependent)細胞。轉化的細胞常表現出非貼壁依賴性(achorage independent),它們能在振蕩培養條件下進行懸浮生長,或在半固體培養基如軟瓊脂上進行生長。
二、常見的細胞附著材料
一次性塑料
一次性的無菌聚丙乙烯培養瓶是簡單的、易生產的培養細胞附著物。它們的透光性好、生長面平滑、質地均勻、易于生產。從制作工藝角度講,聚丙乙烯是疏水性的,表面不適合細胞生長,因此,用于組織培養的塑料要經Y射線照射、化學處理或電離輻射,以產生親水的帶電表面。
玻璃
因其光學特性和表面電荷而成為最早使用的細胞附著物,但現在的大多數實驗室里,玻璃已被合成塑料(一般為聚丙乙烯)所取代,因為合成塑料具有較大的韌性和優良的光學特性,雖然玻璃制品有便宜、易清洗、能保持支持細胞生長特性、可進行干熱和濕熱滅菌、透光性好等優點。只有用強堿(如NaOH或腐蝕性去污劑)處理,然后酸洗中和的玻璃才適于培養細胞 。透光性強的玻璃呈堿性,通常含鉛量高而可能減慢細胞生長。因此,載玻片和蓋玻片需用酸洗或涂層以達到好的效果。
三、細胞培養系統
(1)固定的單層培養物,生長在不受干擾的培養瓶、培養皿和多孔板中。這些是最容易使用的培養系統,需要的設備最少。然而,這些系統對于生產大量的細胞來說是非常耗費人力的。
(2)移動的單層培養物,主要生長在滾筒瓶中。這些容器在電動架或鼓上緩慢旋轉(大約0.5rpm到1rpm),廣泛用于生產大量的細胞。 滾筒瓶采用簡單的技術,但需要投資于適當的設備。
(3)固定的懸浮培養物,在未經處理的培養皿和培養瓶中生長,不需要攪拌。
(4)在機械攪拌的容器(旋轉瓶)、生物反應器或發酵罐中生長的移動懸浮培養物。這些系統在空間、勞動力和培養基方面是經濟的; 因此,攪拌懸浮培養通常是實驗室和工業界生產大量細胞的方法。許多貼壁依賴細胞可以被改造成在微載體上生長,以利用這些系統的優勢。