豬(PRV-gB Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒 定性組成：

試劑的準(zhǔn)備：20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

豬(PRV-gB Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒 定性操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各50μL；

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加稀釋液40μL；

4.  隨后陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷：

①試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔 OD 值平均值≥1.00； 陰性對(duì)照孔 OD 值平均值≤0.15。

② 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

③陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

④陽性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

上海軒澤康生物ELISA檢測(cè)試劑盒常見問題解答：

1.   問：如何選擇合適的陽性對(duì)照？

上海軒澤物解答：陽性對(duì)照的基本組成應(yīng)該盡量與檢測(cè)樣本的組成一致，一般陽性對(duì)照多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì)，加入一定量的待檢物質(zhì)。比如：以人血清為標(biāo)本的測(cè)定，陽性對(duì)照多用確定的病人血清或者以覆蓋人血漿為原料加入一定量標(biāo)準(zhǔn)品。

2. 問：我能否在實(shí)驗(yàn)開始前*收集樣品？

上海軒澤物解答：可以。如若收集的樣本不能及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，請(qǐng)保存至-20℃或按照說明書進(jìn)行保存。應(yīng)避免反復(fù)凍融。