檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被血小板衍生生長因子α（PDGF-α）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血小板衍生生長因子α（PDGF-α）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實驗需自備物品：

1.      酶標儀（450nm）

2.      高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.      37℃恒溫箱

大鼠血小板衍化生長因子αELISA檢測試劑盒性能：

1.     準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。

2.      靈敏度：請參考說明書。

3.      特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.      重復性：板內、板間變異系數小于15% 。

技術小提示：

1.      當混合或重溶蛋白溶液時，盡量避免起沫。

2.      為了避免交叉感染，配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。

3.      每次孵育時，請正確使用封板膠可保證結果的準確性。

4.      混合后的顯色底物在上板前應為無色，請避光保存；假如微孔板后，將由物色變成不同深度的藍色。

5.      終止液上板順序應同顯色底物上板順序一致；加入終止液后，孔內顏色由藍變黃；若孔內有綠色，則表明孔內液體未混勻；請充分混合。

大鼠血小板衍化生長因子αELISA檢測試劑盒常見問題解答：

1.     問：必須同時使用所有的樣本嗎？樣本可能需要分批次收集。

上海軒澤康生物解答：不用。我司每一個試劑盒都使用可拆卸條形微孔板。可以在不同的時間取檢測不同數量的樣本。

2.     問：是否可以使用不同試劑盒的組分？

上海軒澤康生物解答：每一個試劑盒包含具有特定批號的組件，以確保所有組件單獨以及試劑盒中所有其他組件都能達到最佳性能。我司對這些特定批次進行質量控制測試。絕不建議用戶使用自己的組件或其他供應商試劑盒。

3.     如何洗板？

上海軒澤康生物解答：如果您使用的是自動洗板機，我們建議定期檢查校正，并在清洗前用洗板機緩沖液沖洗系統。手動洗板機也是如此。或者使用中繼器或洗滌瓶。用戶應小心確保所有內容物都被吸入，并在無棉紙上輕敲干燥。