dànbáizhì組學測序對樣品的質量和處理有著嚴格的要求,以確保實驗結果的準確性和可重復性。以下是進行dànbáizhì組測序時對樣品的主要要求:
圖1. dànbáizhì質譜測序原理
一、樣品純度
高純度:樣品中的dànbáizhì需要盡可能純凈,避免核酸、脂質和其他非dànbáizhì成分的干擾。
去污染:避免外源性dànbáizhì(如酶、抗體等)的污染,這些可能來自實驗材料或操作過程。
二、樣品濃度
適宜濃度:樣品的dànbáizhì濃度需要達到質譜分析的zuì低要求,通常需要使用特定的方法(如BCA、Bradford或Lowry)準確測定。過低或過高的dànbáizhì濃度都會影響實驗結果。過低的濃度可能導致目標dànbáizhì在質譜分析中難以檢測,而過高的濃度可能導致儀器過載或樣品處理困難。
三、樣品量
足夠的樣品量:除了濃度,總的樣品量(即總蛋白量)也是一個重要考慮因素。根據所使用的質譜儀器和分析方法,所需的樣品量可以從微克到毫克不等。
四、樣品保存和處理
適當保存:樣品應在適當的條件下保存,通常是在-80°C下冷凍保存,避免反復凍融,以防dànbáizhì降解或變性。
溫和處理:樣品處理過程應盡量溫和,避免使用強力的物理或化學方法,以防dànbáizhì變性或降解。
五、樣品兼容性
質譜兼容性:樣品處理過程中使用的試劑和緩沖液應與后續的質譜分析相兼容,避免使用可能干擾質譜檢測的試劑,如含有高濃度鹽、去垢劑或某些防腐劑。
六、特殊樣品
對于凝膠條帶,SDS-PAGE凝膠分離的dànbáizhì樣品,KOMAS和SYPRO Ruby染色的dànbáizhì條帶與質譜鑒定具有良好的兼容性。但對于銀染蛋白,不得使用戊二醛作為固定劑,否則會影響后續的質譜分析。
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