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BiFC 蛋白相互作用(Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)是一種基于熒光蛋白復性的技術,用于研究蛋白-蛋白相互作用。該技術利用熒光蛋白(如黃色熒光蛋白 YFP、綠色熒光蛋白 GFP 或紅色熒光蛋白 mCherry)的片段化特性,將其分裂為兩個非熒光片段,分別與待研究的兩個蛋白融合表達。當這兩個蛋白在細胞內相互作用時,熒光蛋白片段靠近并復性,形成完整的熒光蛋白,恢復熒光信號,從而實現對蛋白互作的可視化檢測。BiFC 蛋白相互作用分析在活細胞環境下進行,不依賴外源性化學物質,因此成為研究細胞信號傳導、蛋白復合物形成及動態互作的工具,在癌癥生物學、神經科學、植物生物學等領域均有廣泛應用。BiFC 蛋白相互作用的主要優勢在于其高靈敏度和直觀可視化能力。相比傳統的蛋白互作檢測方法,如酵母雙雜交(Y2H)、免疫共沉淀(Co-IP)和熒光共振能量轉移(FRET),BiFC 無需外加熒光探針或激發/受體分子,直接通過熒光復性檢測蛋白互作,從而降低了背景噪聲,提高了檢測靈敏度。此外,由于熒光復性后信號較穩定,BiFC 還可以用于檢測短暫或低親和力的蛋白相互作用,這在研究信號轉導、應激反應及其他動態生物過程時具有價值。例如,在細胞周期調控研究中,BiFC 可用于揭示 CDK-Cyclin 復合物的形成;在神經科學研究中,BiFC 被用于檢測突觸蛋白間的相互作用,從而解析神經信號傳遞的關鍵機制。
BiFC 蛋白相互作用分析還具備出色的空間分辨率,可在亞細胞水平解析蛋白相互作用的定位。例如,通過靶向不同細胞器(如線粒體、內質網、高爾基體、細胞核等)的 BiFC 蛋白標記,可以研究特定細胞結構中的蛋白互作。此外,BiFC 還可與共聚焦顯微鏡、活細胞成像技術結合,實現對蛋白互作的動態監測,揭示蛋白復合物的時空變化。例如,在自噬研究中,BiFC 可用于實時觀察自噬體形成過程中關鍵蛋白 ATG 之間的相互作用,為解析自噬機制提供有力證據。
盡管 BiFC 蛋白相互作用技術具有諸多優點,但其也存在一定局限性。例如,熒光蛋白復性通常是不可逆的,這意味著 BiFC 不能用于實時監測蛋白解離過程。此外,熒光蛋白片段復性可能影響目標蛋白的功能或穩定性,導致假陽性或假陰性結果。因此,在實驗設計時,研究人員通常會使用點突變或陰性對照實驗,以驗證 BiFC 信號的特異性。此外,不同熒光蛋白的 BiFC 片段在復性效率、穩定性和熒光強度上可能存在差異,需根據實驗需求選擇合適的熒光蛋白系統。
近年來,BiFC 蛋白相互作用技術不斷優化,以提高其實驗精度和適用性。例如,雙顏色 BiFC(Dual-color BiFC, dcBiFC)和三顏色 BiFC(TriFC)技術允許研究人員同時檢測多對蛋白互作,為復雜的蛋白互作網絡解析提供了更豐富的信息。此外,結合 CRISPR-Cas9 基因編輯技術,BiFC 使得內源性蛋白的互作研究成為可能,提高了實驗的生理相關性。這些技術進步推動了 BiFC 在蛋白質互作網絡、疾病機制研究及新藥篩選等領域的應用。
百泰派克生物科技依托zhuānyè的蛋白質組學研究平臺,為客戶提供高質量的蛋白相互作用檢測服務。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對蛋白質序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對蛋白質的氨基酸組成分析,N端測序,C端測序和全序列分析,以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質,提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種蛋白質標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
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6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!
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