蛋白A瓊脂糖
MCE 國際站：Protein A Agarose
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：2-8°C，禁止凍結，2 年有效
簡介：MCE Protein A Agarose 以高度交聯的 4% 瓊脂糖凝膠為基質，通過化學方法定向、高效偶聯了重組 Protein A，可從動物腹水、血清、細胞分泌液上清等生物體液中一步分離、純化 IgG 等。
概述：MCE Protein A Agarose 是用于分離、純化抗體的通用型親和層析介質。Protein A 是從金黃色葡萄球菌中分離出來的胞壁蛋白，能與哺乳動物的免疫球蛋白 G (IgG) 重鏈 Fc 段結合。此外，和 Protein G 不同，Protein A 還可以與人的 IgE、IgM 等結合。天然的 Protein A 有 5 個 IgGs 結合位點，同時還有許多功能未知的結構域。重組 Protein A 只保留了 IgGs 結合位點，大大減少了非特異性吸附。MCE Protein A Agarose 以高度交聯的 4% 瓊脂糖凝膠為基質，通過化學方法定向、高效偶聯了重組 Protein A，可從動物腹水、血清、細胞分泌液上清等生物體液中一步分離、純化 IgG 等。本品儲存于 20% 乙醇中，每 1 mL 總體積中 0.5 mL 為凝膠。使用前，需將 Protein A Agarose 充分重懸混勻后吸取。
描述：
蛋白 A 是從金黃色葡萄球菌中分離出來的一種細菌細胞壁蛋白，主要通過 Fc 區與大多數哺乳動物 IgG 結合。天然蛋白 A 含有 5 個 IgG 結合域和許多其他功能未知的域。后者已從重組蛋白 A 中消除，以減少非特異性結合。
MCE 蛋白 A 瓊脂糖是一種與重組蛋白 A 偶聯的 4% 高度交聯瓊脂糖試劑，可有效純化哺乳動物單克隆和多克隆抗體，例如人 IgG、IgE、IgM。
| 特點 | |
|---|---|
| 基質球形 | 4% 交聯瓊脂糖 |
| 取代度 | 2 mg 重組蛋白 A/mL 沉降樹脂 |
| 珠子直徑 | 45-165 μm |
| 結合容量 | 20 mg 人 IgG/mL 沉淀樹脂 |
| 儲存溶液 | 50% 漿液，1× PBS，含 20% 乙醇 |
操作說明：1. Buffer 的準備建議用高純水配制 Buffer，且配制后通過 0.45 μm 濾膜過濾除菌。2. 樣品處理：(1) 為了確保抗體樣本能夠高效結合在 Protein A Agarose 上，需要用平衡緩沖液稀釋血清、腹水等，比例至少為 1:1；或者把樣本放在平衡緩沖液中透析過夜。(2) 樣品在上樣前離心或用 0.45 μm 濾膜過濾，可減少雜質、提高抗體純化效率、防止堵塞柱子。3. Protein A Agarose 的裝填：(1) 用去離子水沖洗柱底篩板，確保柱底篩板上無氣泡，關閉柱底出口，并在柱底部留出 1-2 cm 的去離子水。(2) 將 Protein A Agarose 懸浮混勻，小心地將懸液連續倒入柱管中。借助玻璃棒沿著柱壁倒入懸液可減少氣泡的產生。(3) 打開柱底部出口，最初讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至最終流速 1 mL/min，這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊，也可以得到很好的裝填效果。標記柱床高度。4. 樣品純化：(1) 平衡：使用至少 5 倍柱體積的平衡緩沖液平衡層析柱，讓緩沖液緩慢流出，流速大約為 1 mL/min。(2) 上樣：利用泵或注射器上樣。讓樣品緩慢流出，流速大約為 0.5-1 mL/min，收集流出液。如有必要，可以重復或循環上樣以提高得率。(3) 洗雜：用平衡緩沖液沖洗柱子，流速大約為 2 mL/min，直到 OD280 紫外吸收達到一個穩定的基線（一般 15-30 倍柱體積），收集流出液。(4) 洗脫：洗雜完畢后，用 10-15 倍柱體積的洗脫緩沖液洗脫柱子，流速大約為 1 mL/min，收集洗脫液，并立刻加入中和緩沖液（1/10 洗脫液體積）調節 pH 到 7.4。(3) SDS-PAGE 檢測：將純化得到的抗體樣品（包括流出組分、洗雜部分和洗脫部分）以及原始樣品使用 SDS-PAGE 檢測純化效果。5. 填料再生：使用 10 倍柱體積的鹽酸胍溶液（6 M，pH 8.0）或洗脫緩沖液清洗，然后立即用 5 倍柱體積的平衡緩沖液清洗。Protein A Agarose 能夠重復再生 10 次，而不會有明顯的吸附量下降。6. 填料儲存：Protein A Agarose 需保存在含有 20% 乙醇的平衡緩沖液中，2-8°C 保存，嚴禁凍結。
注意事項：1. 請勿干燥或冷凍本產品，以免引起效價降低，降低純化效率。2. Protein A 親和層析介質的靜態吸附能力 >20 mg 人 IgG/mL 介質，其動態吸附能力會受到目的抗體濃度、上樣流速等因素影響而產生變化。3. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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