熒光素標記鬼筆環肽
MCE 國際站：Fluorescein Phalloidin
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20℃ 6 個月避光保存，避免反復凍融
簡介：熒光素標記鬼筆環肽是一種高親和的 F-肌動蛋白探針，與綠色染料熒光素 (Fluorescein) 偶聯。
概述：鬼筆環肽 (Phalloidin) 是從鬼筆鵝膏中分離到的一種環狀七肽毒素，以較好的親和力和特異性結合肌動蛋白絲 F-actins (actin filaments)。通常將鬼筆環肽與熒光染料偶聯來研究細胞中 F-actins 的分布。熒光標記的鬼筆環肽極少會非特異性染色，染色和未染色區域之間的對比度非常大，可使 F-actins 高效染色。MCE 提供 3 種熒光標記的鬼筆環肽 (1000× Stock Solution in DMSO)，AMCA Phalloidin (HY-K0901，藍色熒光)、Fluorescein Phalloidin (HY-K0902，綠色熒光)和 Rhodamine Phalloidin (HY-K0903，橙色熒光)。這些鬼筆環肽衍生物可發出穩定、高亮度的熒光，染色反應特異性強，對比性高，適用于 F-actins 的定性和定量檢測實驗
描述：
鬼筆環肽是一種蘑菇衍生的毒素，可用于特異性標記細胞骨架的 F- 肌動蛋白（肌動蛋白絲）。它與許多不同動物和植物物種的所有肌動蛋白絲變體結合。通常，鬼筆環肽與熒光染料結合使用。鬼筆環肽以高選擇性結合 F- 肌動蛋白，而熒光素提供穩定而明亮的綠色熒光。
熒光素鬼筆環肽是 DMSO 中的 1000× 儲備溶液，可方便地標記、鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片、細胞培養物或無細胞實驗中的 F- 肌動蛋白。
操作說明：1. 準備 1× 熒光標記鬼筆環肽工作液吸取 1 μL 1000× 熒光標記鬼筆環肽儲存液到 1 mL 含有 1% BSA 的 PBS 緩沖液中即可得到 1× 工作液。注 1：不同細胞染色情況不同，相應熒光標記鬼筆環肽的使用量需根據不同情況調整。注 2：1% BSA 的使用是為了降低非特異性的背景染色。2. 細胞染色步驟1) 用 PBS 清洗細胞 2-3 次。2) 用含有 3.7％ 甲醛的 PBS 溶液固定細胞，冰上固定 15 分鐘。注：甲醇可以在固定過程中破壞肌動蛋白。因此最好避免含有任何甲醇的固定劑。優選的固定劑是不含甲醇的甲醛。3) 用 PBS 清洗細胞 2-3 次。4) 可選步驟：室溫下，用含 0.1％ Triton X-100 的 PBS 溶液透化細胞 3-5 分鐘，增加其通透性。用 PBS 清洗細胞 2-3 次。5) 按 100 μL/孔 (96 孔板)的加入量加入 1× 熒光標記鬼筆環肽工作液，室溫避光染色 20-90 分鐘。6) 用 PBS 清洗細胞 2-3 次，去除多余的熒光標記鬼筆環肽。7) 按每種熒光標記鬼筆環肽的最佳推薦激發/發射波長，于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察 (AMCA Phalloidin, Ex/Em=344/432 nm；Fluorescein Phalloidin, Ex/Em= 497/516nm； Rhodamine Phalloidin, Ex/Em= 552/578 nm)
注意事項：1. 熒光標記鬼筆環肽的一個單位 (T) 的定義：按照推薦濃度，每次用量為 100 μL 染色工作液時，可以檢測的次數。2. 鬼筆環肽具有一定毒性 (LD50 of phalloidin = 2 mg/kg)，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。3. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品
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