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Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒 | MedChemExpress (MCE)

閱讀:93      發(fā)布時間:2024-9-10
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Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒

MCE 國際站:Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

品牌:MedChemExpress (MCE)

存儲條件: -20℃ 保存一年。避光保存,避免反復凍融。

簡介:MCE Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒可方便、快捷的檢測細胞凋亡。經(jīng) Annexin V-FITC 和 PI 聯(lián)合染色后,正常細胞基本無熒光(Annexin V-/PI-),早期凋亡細胞呈綠色熒光(Annexin V+/PI-),晚期凋亡細胞及壞死細胞則呈綠色和紅色熒光(Annexin V+/PI+)。

概述:MCE Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒采用 FITC 標記的重組人Annexin V 檢測細胞凋亡。在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸 PS)位于細胞膜內(nèi)側(cè);細胞凋亡早期, PS 會外翻到細胞膜外側(cè)。 Annexin V (膜聯(lián)蛋白 V)是一種 Ca 依賴性磷脂結(jié)合蛋白,可與 PS 特異性結(jié)合,因此Annexin V 常作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。Annexin V 經(jīng) FITC 標記后可發(fā)綠色熒光,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。此外,本試劑盒中的碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液是一種不能穿透細胞膜的紅色熒光染料,可對凋亡晚期細胞及壞死細胞染色。經(jīng) Annexin V-FITC 和 PI 聯(lián)合染色后,正常細胞基本無熒光(Annexin V-/PI-)早期凋亡細胞呈綠色熒光(Annexin V+/PI-),晚期凋亡細胞及壞死細胞則呈綠色和紅色熒光(Annexin V+/PI+)。

描述:

MCE Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測試劑盒提供了一種快速、方便的檢測細胞凋亡和壞死的方法。在正常活細胞中,磷脂酰絲氨酸 (PS) 位于細胞膜的細胞質(zhì)表面。在細胞凋亡開始時,PS 從膜的內(nèi)層轉(zhuǎn)移到外層。Annexin V 是一種 35-36 kDa Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白,對 PS 具有高親和力。用綠色熒光 FITC 標記的 Annexin V 可以通過與外層暴露的 PS 結(jié)合來識別凋亡細胞。碘化丙啶 (PI) 是一種細胞膜不通透性染料,對活細胞和早期凋亡細胞有效,但對晚期凋亡細胞和壞死細胞則呈紅色熒光。染色后活細胞無熒光或僅有少量熒光(Annexin V-/PI-),早期凋亡細胞呈綠色熒光(Annexin V+/PI-),晚期凋亡細胞及壞死細胞呈紅色和綠色熒光(Annexin V+/PI+)。



操作說明:1. 收集細胞: 收集 1-5 × 10 個細胞。懸浮細胞:1000 g 離心 5 min,棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀,1000 g 離心 5 min,棄去上清,保留細胞沉淀。貼壁細胞:小心吸取細胞培養(yǎng)液保存?zhèn)溆谩<尤?PBS 洗滌后,加入適量胰酶消化液(盡量不含 EDTA,以免影響 Annexin V 和 PS 的結(jié)合)消化細胞。加入前面收集的培養(yǎng)液,輕輕吹打細胞,制成單細胞懸液,1000 g 離心 5 min,棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀,1000 g 離心 5 min,棄去上清,保留細胞沉淀。2. 加入 195 μL Binding Buffer,輕輕重懸細胞。3. 加入 5 μL Annexin V-FITC,輕輕混勻。4. 加入 10 μL PI Stain,輕輕混勻。5. 室溫下避光孵育 10-20 min。注: 孵育過程中可輕輕顛倒數(shù)次以加強染色效果。6. 檢測與分析流式細胞儀檢測:用流式細胞儀檢測熒光強度。注:a. 流式檢測時,F(xiàn)ITC 最大激發(fā)波長為 488 nm,最大發(fā)射波長為 525 nm,在 FL1 通道檢測;PI-DNA 最大激發(fā)波長為 535 nm,最大發(fā)射波長為 617 nm,在 FL2 或FL3 通道檢測。b. 建議設(shè)置三組對照:未染色組、PI 單染組及 Annexin V-FITC 單染組。熒光顯微鏡檢測:1000 g 離心 5 min,棄去上清,加入 50-100 μL Binding Buffer 輕輕重懸細胞沉淀,涂片后用熒光顯微鏡檢測熒光強度。

注意事項:1. 熒光染料都存在淬滅的問題,染色后應(yīng)盡快檢測熒光強度,且整個實驗過程盡量避光下進行。2. 若使用胰酶處理貼壁細胞,應(yīng)盡可能地去除胰酶,防止 Annexin V-FITC 降解從而導致染色失敗。3. 流式細胞儀檢測時,若 Annexin V-FITC 單獨染色組出現(xiàn)較多 PI 假陽性細胞,可用 PBS 將 Annexin V-FITC 稀釋 3-10 倍后再進行檢測。4. Annexin V-FITC 和碘化丙啶(PI)均對人體有害,操作時務(wù)必小心。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。6. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品:PF-01247324  | PXYC1  | Crizanlizumab  | Margatoxin  | Clonidine  | TMB  | Mometasone furoate  | U-73343  | NSC697923  | Dehydroglyasperin C

Trending products:Recombinant Proteins  |  Bioactive Screening Libraries  |  Natural Products  |  Dye Reagents  |  PROTAC  |  Isotope-Labeled Compounds


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