293T HCP ELISA 檢測試劑盒說明書

貨號：HG-HCP001

本試劑僅用于檢測樣本中293T HCP組分的含量。

產品簡介：

本品采用雙抗夾心法檢測樣本中293T HCP含量，將293T抗體預包被在微孔板上，將標準品與待測樣本加入到已包被的反應孔內進行孵育。存在的293T蛋白會定量的與微孔板中的抗體結合，洗滌除去未結合物，加入生物i素標記的抗293T蛋白抗體，最后加入親和素標記HRP，形成抗體-抗原-生物i素抗體-酶標親和素復合物，通過TMB顯色程度指示樣品中蛋白含量。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑盒組分。
檢測范圍： 37-27000 ng/mL
定  量  限： 37ng/mL
精  密  度： CV%≤10%, RE%≤±15%

規格：

96 T

應用：

本試劑盒采用雙抗夾心法定量分析以293T為表達細胞的生物藥中宿主蛋白雜質，可檢測293T宿主蛋白雜質所需要的全部組分。

產品組成：

產品儲存條件與有限期：

2~8℃避光保存，有效期8個月。

需要準備材料：

◆?酶標儀
◆ 去離子水
◆ 微孔板恒溫振蕩器
◆ 全新濾紙
◆ 微量加液器及吸頭
◆ 渦旋振蕩器

試劑配制：

1.平衡： 將所需試劑移到室溫（18~25℃）平衡30分鐘。
2.配液：
?1×PBS-T 洗滌液：計算實驗所需工作液體積，取適量 10×PBS-T 洗液，用去離子水進行 10 倍稀釋，混勻后備用；
?稀釋液工作溶液：根據實驗需求取適量稀釋液干粉按（1g/100mL）的比例，用 1× PBS-T 溶解混勻，也可一次性稀釋后分裝，放置 -20 ℃保存。避免稀釋液反復凍融。
③檢測抗體工作液：計算實驗所需工作液體積，取適量生物i素抗體用稀釋液進行100倍稀釋，充分混勻備用；
④酶結合物工作液：計算實驗所需工作液體積，取適量酶結合物用稀釋液進行10倍稀釋，充分混勻備用；
⑤標準品及樣品使用稀釋液進行稀釋。
3.標準品稀釋：

實驗步驟：

1.使用前，將所有試劑充分混勻，避免產生氣泡。
2.根據實驗孔數量，確定所需的板條數目，剩余板條放回含干燥劑的鋁箔袋，密封。
3.加樣: 每孔加入100μL標準品、樣品、陰性對照至相應孔中。用封板膜封板后在室溫（18~25℃）下反應1.5h。

4.洗滌: 棄去各孔內液體，用1×PBS-T洗滌液注滿微孔（250μL/孔），靜置30秒后棄去孔內液體；重復3次，每一次洗板完成后在濾紙上拍干。
5.加生物i素檢測抗體工作液: 每孔加生物i素檢測抗體工作液100μL，用封板膜封板后室溫（18~25℃）下反應45分鐘。
6.洗滌: 棄去各孔內液體，用1×PBS-T洗滌液注滿微孔（250μL/孔），靜置30秒后棄去孔內液體；重復3次，每一次洗板完成后在面巾紙上拍干。
7.加酶結合物工作液: 每孔加酶結合物工作液100μL，用封板膜封板后室溫（18~25℃）下反應30分鐘。
8.洗滌: 棄去各孔內液體，用1×PBS-T洗滌液注滿微孔（250μL/孔），靜置2 min后棄去孔內液體；重復3次，每一次洗板完成后在面巾紙上拍干。
9.顯色: 每孔分別加底物顯色液100μL，輕微振蕩混勻后用封板膜封板置25℃避光顯色15分鐘。
10.測定: 每孔加終止液100μL，輕微混勻。選擇酶標儀主波長450nm，測定各孔吸光值（OD值）。

結果分析：

本產品建議采用四參數的擬合方式進行線性擬合及計算。

標準曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實際測定為準）：

注意事項

1. 試劑應按標簽說明儲存，使用前室溫（18-25℃）平衡。
2. 預包被板條使用前，請平衡至室溫再打開外包裝袋，實驗中不用的板條應立即放回包裝中密閉封口， 4℃可保存一個月。其余不用試劑應包裝好或蓋好。
3. 標準品、生物i素及酶結合物體積量很小，使用前請短暫離心，以使管壁或管蓋的液體沉積到管底。
4. 實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
5. 使用前檢查試劑盒內各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應應充分混勻或搖勻對實驗結果尤為重要。
6. 洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應孔中吸水。
7. 底物顯色液對光敏感，避免長時間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結果。
8. 本產品為一次性使用的試劑盒，請在效期內使用。