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【預期用途】：HPV 18 假病毒(GFP)可以用于HPV抗血清或者中和抗體滴度檢測

【主要成分】：Brij58、Benzonase、Plasmid Safe、DPBS-Mg、NaCI、葡萄糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二的鈉、氯化的鉀和假病毒。

【存儲條件及有效期】：凍存于-75±5℃以下，有效期大于12個月。

【使用方法】：HPV 18 假病毒(GFP)

1.收集對數生長期的293FT細胞，用血球計數板計數，用DMEM培養液（含10%胎牛血清、0.1mM非必需氨基酸、6mM L-谷氨酰的胺、1mM丙酮酸鈉、1%青鏈霉的素的DMEM高糖培養基）稀釋細胞濃度至1.5×l05個/mL。將細胞接種于96孔細胞培養板中，100μl/孔。放CO2培養箱中孵育4-6h后用于假病毒的感染。

2.假病毒稀釋：取出凍存的假病毒置于冰上融化或4±1℃或常溫條件下自然融化，待其融化后，將假病毒使用DMEM培養基（含10%的胎牛血清）稀釋到工作濃度。因假病毒對不同細胞的感染效率不同，正式實驗前建議進行預實驗，以確定最適病毒量 (產品標簽上標明了參考滴度,優先推薦的病毒稀釋倍數=參考滴度/2)。

3.待測樣品和假病毒的預混 ：取新的 96 孔細胞培養板，每孔加入55μl樣品和55μl假病毒稀釋液，輕拍四周混勻，同時設培養液替代樣品的假病毒對照孔和無樣品無假病毒的空白對照孔。

4.待測樣品和假病毒混合液的預孵育 ：將 96 孔培養板 4℃冰箱放置 1 小時。

5.假病毒感染：從 96 孔培養板各孔中吸取 100μL 的假病毒和待測樣品組合物及對照，貼壁緩緩加入提前已鋪好細胞的培養板對應孔中，輕拍培養板四周混勻。

6.感染檢測：細胞感染假病毒第三天,通過觀察綠色熒光蛋白表達的活性判定感染效率。

7.為了更好的保持產品活性，假病毒產品盡量減少反復凍融，建議客戶收到產品后，使用DMEM培養基（含10%的胎牛血清）稀釋到1ml，然后分裝成50μl的小包裝后凍存于-75±5℃保存，分次使用（也可以依據客戶自身實驗需要進行分裝）。

【注意事項】：

1.我們提供的HPV假病毒為復制缺陷型病毒，即該病毒感染目的細胞后不會利用宿主細胞產生新的病毒顆粒；

2.實驗操作需要在生物安全柜條件下進行，并穿戴好實驗服、口罩和手套等個人防護用品；

3.如果實驗時本品不慎濺出，請立即使用84消毒液對其進行滅活處理，如果濺到眼睛、皮膚或其他身體部位請立即使用大量清水沖洗；

4.使用本品所產生的實驗廢棄物需要通過高壓滅菌處理后按照醫療廢棄物處理要求進行處理。

5.博奧龍HPV假病毒產品滴度定義方式：使用儀器讀數（酶聯免疫熒光斑點分析儀，CTL，S6 Universal），以讀數為700時（可以表示為儀器檢測的范圍內700個細胞有熒光），當前假病毒稀釋倍數為該批次產品的滴度值。