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中級(jí)會(huì)員 | 第2年

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生化試劑
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一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量測(cè)定試劑盒-說明書

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一氧化氮(Nitric oxideNO)含量測(cè)定試劑盒說明書

分光光度法 50 /48

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

NONitric OxideNO)廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中,特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì),發(fā)揮信號(hào)傳遞的作用,是一種新型的生物信使分子,在機(jī)體的生理、病理過程中起著重要的作用。

測(cè)定原理:

 

2

 
在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO —,在酸性條件下,NO2與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物,進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合,產(chǎn)物在 550nm 處有特征吸收峰,測(cè)定其吸光值,可以計(jì)算 NO 含量。


組成:

 

產(chǎn)品名稱

DC6003-50T/48S

Storage

提取液:液體

50ml

4℃

試劑一:液體

15ml

4℃避光

試劑二:粉劑

15ml

4℃避光

說明書

一份

試劑二:液體 15ml×1 瓶,4℃避光保存。(用之前 60℃加熱震蕩 15min

自備儀器和用品:

天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計(jì)、1ml 玻璃比色皿、蒸餾水。

樣品理:

1.      組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿。10000g4℃離心 15min,取上清,置冰上待測(cè)。

2.      細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(ml500~10001 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加1ml 提取液,冰浴超聲波破碎細(xì)胞功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min;然后 10000g4℃,離心 15min,取上清置于冰上待測(cè)。

3.      體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品:直接測(cè)定。

測(cè)定步驟和操作表:

 



空白管

測(cè)定管



樣品(μl


400


提取液(μl

400


試劑一(μl

250

250

試劑二(μl

250

250

混勻,室溫靜置 15min1ml 玻璃比色皿,測(cè)定 A550ΔA=A 測(cè)定-A 空白










 

NO 含量計(jì)算

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y= 0.016x -0.0103R2= 0. 9986 1、組織樣品:

(1) 按樣本質(zhì)量計(jì)算

NO 含量(μmol/g 鮮重)=ΔA +0.0103÷0.016×V 反總÷V ÷V 樣總×W×10-3

= 0.14×ΔA +0.0103÷W

(2) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

NO 含量(μmol/mg prot=ΔA +0.0103÷0.016×V 反總÷V ×Cpr×10-3

= 0.14×ΔA +0.0103÷Cpr

2、細(xì)胞:

NO 含量(μmol/104 cell=ΔA +0.0103÷0.016×V 反總÷V ÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)×10-3

= 0.14×ΔA +0.0103÷細(xì)胞數(shù)量(萬個(gè)

3、其他樣品:

NO 含量(μmol/L=ΔA +0.0103÷0.016×V 反總÷V

= 140×ΔA +0.0103

V 反總:反應(yīng)總體積,0.9mlV 樣:反應(yīng)中樣品體積,0.4mlV 樣總:加入提取液體積,1mlW:樣品質(zhì)量,gCpr:蛋白濃度,mg/ml

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