諾博萊德 葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-非酶法

葉綠體蛋白提取試劑盒-非酶法 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5059

產(chǎn)品名稱：葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-非酶法

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-非酶法

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5059 葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-非酶法

葉綠體是植物細(xì)胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的,由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對(duì)象。葉綠體蛋白提取試劑盒用簡便快速的方法即可從各種植物樣本中快速提取得到葉綠體總蛋白。本試劑盒適用于提取新鮮植物樣本的葉綠體蛋白，用于凍存樣本的提取時(shí)由于凍存過程中大部分葉綠體會(huì)被破壞，葉綠體蛋白回收率較低。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解葉綠體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

葉綠體是植物細(xì)胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的, 由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對(duì)象。

葉綠體蛋白提取試劑盒用簡便快速的方法即可從各種植物樣本中快速提取得到葉綠體總蛋白。

本試劑盒適用于提取新鮮植物樣本的葉綠體蛋白，用于凍存樣本的提取時(shí)由于凍存過程中大部分葉綠體會(huì)被破壞，葉綠體蛋白回收率較低。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解葉綠體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白也用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含 AEBSF，可以避免由于 AEBSF 導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(Mass Spectrometry,MS)檢測和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。

本試劑盒采用非酶法提取，提取過程簡單方便，速度快，可在1小時(shí)內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法較低。酶法提取制備的葉綠體總蛋白，回收率提高，蛋白純度高，保持天然活性，但是耗時(shí)較長。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對(duì)提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、100μm細(xì)胞篩、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便。

2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3、紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

4. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

5. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

6. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

7. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果

二、葉綠體蛋白提取：

1. 提取液制備：

將試劑 C1 和試劑 C2 混合，配成蛋白提取液 C，充分混勻備用。

每 500μl 蛋白提取液 C 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】

1)蛋白提取液 C 置 4℃保存，長期不用的可以分裝后-20℃保存。

2)根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

3)加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

4)以下步驟中提到的蛋白提取液 C 為本步驟配制的提取液 C。

2. 取 200-500 mg 新鮮植物樣本葉片，洗凈擦干后去除葉梗和粗脈。用手術(shù)jian刀盡可能剪碎。

3. 加入 1 ml -2 ml 試劑 A，用勻漿機(jī)/組織攪碎機(jī)/Dounce 勻漿器充分勻漿。

4. 將勻漿液用 100μm 細(xì)胞篩過濾。

【注】:

1)沒有細(xì)胞篩的話，在 4℃，稍微靜置，讓粗纖維，成團(tuán)組織塊等沉降，或者以低于 100×g 力條件下離心 1 分鐘，收集細(xì)胞上清，棄較大組織塊沉淀。

2)有些含黏液較多的樣品可能難以吸取，可以將 1m 吸頭尖稍微剪掉一點(diǎn)使用。

3)液體量較少細(xì)胞篩不好過濾時(shí)可以補(bǔ)加 2ml PBS 緩沖液后過濾。

5. 將濾液在 500×g 條件下離心 5 分鐘，棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在 800×g 條件下離心 5 分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清 3000×g 力離心 15 分鐘，棄上清，收集沉淀。

8. 將沉淀用 1 ml 試劑 B 重懸。

9. 將懸液 3000×g 離心 15 分鐘，棄上清，收集沉淀。

10. 在沉淀中加入 100-300μl 葉綠體蛋白提取液 C，充分混勻。

11. 將蛋白提取液在 4℃條件下振蕩 20-45 分鐘。

【注】:

1)振蕩時(shí)用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微晃動(dòng)即可。

2)沒有振蕩條件也可不振蕩，置 4℃℃靜置，稍微延長試劑 C 處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

3)試劑 C 處理時(shí)間根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整。至葉綠體充分裂解，離心后沉淀體積減少。

12. 在 4℃，12000×g 條件下離心 15 分鐘。

13. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到葉綠體總蛋白。

14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】:

1)建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2)蛋白樣品-80℃℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

15. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于不能含有去污劑/鹽的下游實(shí)驗(yàn)。

【注】

1)蛋白樣品中含有鹽，需要脫鹽處理后用于雙向電泳。

2)經(jīng)透析或脫鹽離心柱處理的蛋白樣品不含有去垢劑和高濃度鹽。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

葉綠體蛋白提取試劑盒-非酶法 常備現(xiàn)貨

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