諾博萊德 TOP 10感受態(tài)細胞E.coli TOP 10 Competent Cells

TOP 10感受態(tài)細胞E.coli    載體構建

產品貨號：C9088

產品名稱：TOP 10感受態(tài)細胞E.coli TOP 10 Competent Cells

英文名稱：E.coli TOP 10 Competent Cells

產品規(guī)格：20*100ul/10*100ul

產品簡介：

外觀(性狀)：干冰運輸，單加10kg干冰費

儲存條件：液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個月

具體產品的參數(shù)以收到產品說明書的參數(shù)為準

NobleRyderC9088 TOP 10感受態(tài)細胞E.coli TOP 10 Competent Cells是采用大腸桿菌TOP 10菌株經特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108，-70℃保存六個月轉化效率不發(fā)生改變。

基因型：F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

特點：一種用于鋪制與培養(yǎng)質粒平板和粘粒平板的重級缺陷的抑制型菌株。其中φ80 lacZΔM15基因的產物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α-互補，可用于藍白斑篩選。該菌株適用于高效的DNA克隆和質粒擴增，能保證高拷貝質粒的穩(wěn)定遺傳。

操作方法：（以下各步驟均為無菌操作）

1、將感受態(tài)細胞置于冰上融化，以下實驗以100ul感受態(tài)細胞為例。

2、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速轉移到冰浴中放置2-3分鐘，注意不要搖動離心管。

4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃180rpm振蕩培養(yǎng)1小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調整，如轉化的DNA總量較多，可取100ul左右的轉化產物涂板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉化產物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項：

1、感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。

2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3、轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。

4、轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失降到*低。

TOP 10感受態(tài)細胞E.coli    載體構建

產品訂購信息

C9088 TOP 10感受態(tài)細胞E.coli TOP 10 Competent Cells  20*100ul/10*100ul