諾博萊德 通用SP檢測(cè)試劑盒SP Kit(Broad Spectrum)

通用SP檢測(cè)試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：SP8829

產(chǎn)品名稱(chēng)：通用SP檢測(cè)試劑盒SP Kit(Broad Spectrum)

英文名稱(chēng)：SP Kit(Broad Spectrum)

產(chǎn)品規(guī)格：3ml/ 18ml/6ml/110ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：-20℃，avoid light，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder SP8829 通用SP檢測(cè)試劑盒SP Kit(Broad Spectrum)

本試劑盒適合于一抗為小鼠IgG或兔IgG的免疫組化實(shí)驗(yàn)DAB顯色。

SP 試劑盒是專(zhuān)為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，同親和素一樣，對(duì)生wu素有ji高的親和力，親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)（PI=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性，對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，因此基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。

操作步驟（僅供參考）:

以石蠟切片為例

1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯，三次乙醇)。

2. 可選步聚：

a、熱修復(fù)抗原，將切片浸入0.01M檸檬酸鈉緩沖液（PH6.0），電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10分鐘后，反復(fù)1-2次。冷卻后PBS（pH7.2-7.6）洗滌1-2次。

b、酶消化，滴加消化液，37℃10分鐘，PBS（pH7.2-7.4）洗滌2-3次。

c、跳過(guò)此步，直接進(jìn)入下一步。

3. 3%H2O2室溫處理5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。

4. 滴加封閉液（建議稀釋至10-20%），室溫20分鐘。甩去多余液體，免洗。

5. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋?zhuān)ㄏ♂尯蟮囊豢?℃可保存一周），也可另行購(gòu)買(mǎi)抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗37℃ 孵育1小時(shí)左右或20℃2小時(shí)左右，也可4℃過(guò)夜。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次2分鐘。（一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō)，陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間；背景過(guò)高時(shí)，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。）

6． 根據(jù)用量，用稀釋液將羊抗兔IgG或羊抗小鼠IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1mL稀釋液加入10μL羊抗兔IgG或羊抗小鼠IgG濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加羊抗兔IgG或羊抗小鼠IgG工作液，20-37℃ 孵育30分鐘。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次2分鐘。

7．根據(jù)使用量，用稀釋液將鏈霉親和素-POD濃縮液按1:100稀釋成工作液(1mL稀釋液加入10μL鏈霉親和素-POD濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加鏈霉親和素-POD工作液，20-37℃，30 分鐘。PBS （pH7.2-7.4）洗滌4次，每次5分鐘。

8．DAB顯色：根據(jù)用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mLPBS加入50μL20×DAB顯色液A，加入50μL20×DAB顯色液B 。充分混勻后滴加到切片上。室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，一般在5-30 分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。

9．蘇木素輕度復(fù)染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。

對(duì)于細(xì)胞爬片，固定后，PBS漂洗兩次，再用0.5%TritonX-100室溫孵育20分鐘，PBS漂洗兩次，3%H2O2處理15分鐘；PBS漂洗兩次，接上述第4步。

對(duì)于冰凍切片，固定后，PBS漂洗兩次，接上述第二步。

注意事項(xiàng)：

如果染色背景過(guò)高，在SP反應(yīng)之后，DAB顯色之前，用加有0.01—0.02%TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗滌切片4次，PBS洗2次，然后DAB顯色。

通用SP檢測(cè)試劑盒 常備現(xiàn)貨

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