引言：代謝組學旨在表征和定量生物系統中的完整小分子代謝通路或 代謝物組。代謝物組包含小分子多元混合物（包括氨基酸、糖 和磷酸糖、生物胺和脂質）。非靶向代謝組學挑戰性，因 為其要求定性和定量上百個不同種類化合物，而有關這些代謝 物的經驗知識有限。因此，有必要使用一個既可以以非靶向的 方式靈敏檢測特定分子，又可以提供質量數信息，用于確 認未知物并對其進行結構解析的檢測系統。
氣相色譜質譜聯用儀（GC-MS）基于其自身的優點經常用于 代謝組學分析，尤其是其色譜分辨率、重現性、峰容量和便于 使用的質譜庫。GC為非靶向代謝組學中生物標志物的發現提 供了的色譜分離能力，但是，由于目前缺乏質譜儀的 支持，從而限制了提供用于分析復雜樣品（例如，哺乳動物的 肌肉組織）的動態范圍、質量數和掃描速度。鑒于大部分 重要代謝物的極性特征，必須將其衍生化，以使其有效揮發， 從而確保得到良好的色譜分離。代謝組學分析尤其是臨床代謝 組學要求高通量和先進的自動化技術。
本項研究展示了新型 Thermo Scientific™ Orbitrap™ GC-MS 完整非靶向代謝組學工作流程，檢測了大鼠模型中的生物標記 物，以判定其死亡時間。死亡時間（PMI）推斷是法醫調查中 一項關鍵也是困難的任務，尤其當尸體溫度與周圍環境溫 度達到平衡后。由于當前用于確定 PMI 的方法不精que性且以 目視檢查尸體為主。因此，建立一種實驗方法，使用耐用生物 標志物推斷死亡時間可輔助法醫調查。
該 GC-MS 裝置使用基于 Orbitrap 的檢測器，得到超高質量數分辨率、亞 ppm 質量數精度、寬動態范圍以及一定的掃描 速度，用于有效定量極復雜代謝組學樣品。高分辨率、穩定的 質量數精度和快速的掃描速度是進行穩定的數據解卷積的關 鍵因素，以檢測重疊 TIC 峰中的化合物，進行非靶向代謝組 學分析。電子轟擊電離（EI）裂解模式也適合基于應用廣泛的 NIST 庫和 Wiley 庫進行匹配，以識別化合物，同時為更深入的 表征提供質量數。
儀器和方法設置： 樣品制備 從各個大鼠腿部肌肉組織切片取樣，以時間順序增加進行尸檢 及采樣。采用氯fang/甲醇/水（1:3:1）提取經勻質的組織切片中 的代謝物，在冰塊下孵育 1 小時。蛋白質和 DNA 進行離心沉 淀。去除上清液，貯藏在 -80 ℃ 條件下備用。
詳細文檔請點擊：GC-MS
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