焦糖色是我國允許使用的一種食用著色劑，應用廣泛，涵蓋食品、釀酒、制藥等多個領域。
上通常按其生產工藝把焦糖色分為四類：Ⅰ普通焦糖；Ⅱ亞硫酸鉀鈉焦糖；Ⅲ氨焦糖；Ⅳ亞硫酸銨焦糖。我國GB 2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》中規定啤酒中Ⅲ、Ⅳ類焦糖色使用*為50g/L。
Ⅲ、Ⅳ類焦糖色在生產過程中會產生一定量的有害物質4-甲基咪唑，GB 8817-2001《食品添加劑 焦糖色（亞硫酸銨法、氨法、普通法）》中規定，4-甲基咪唑在焦糖色中含量小于0.02%，然而啤酒并無相關衛生標準。
研究表明，4-甲基咪唑能導致動物長腫瘤，有可能給人體帶來致癌風險，目前，4-甲基咪唑檢測方法主要有分光光度法、色譜法和色譜-質譜聯用法等。
國內對4-甲基咪唑的檢測主要集中于焦糖色原料，其次是對其相關食品醬油和可樂，對啤酒中4-甲基咪唑含量測定鮮見報道。
本研究建立固相萃取-超液相色譜-串聯質譜法測定啤酒中4-甲基咪唑含量，旨在為啤酒的安全性評價以及相關標準的制定提供。
一、實驗儀器
氮吹儀 液質聯用儀，高速離心機、電子天平、漩渦振蕩器、超聲波清洗器
二、實驗試劑
4-甲基咪唑標準品，4-MEI-D5（含量為98.7%），乙腈、甲醇、甲酸（純度≥98%）均為色譜純，氨水（分析純），鹽酸（優級純），水為超純水。其他試劑均為分析純。
三、標準溶液的配置
4-甲基咪唑標準儲備液的配置：稱取4-MEI 6.29mg（至0.0001g），用水溶解后轉移至25ml容量瓶中，加水定容配置成質量濃度為250μg/ml的標準儲備液，于4℃條件下保存。精密量取上述儲備液適量，加水制成每1ml含1.0μg的標準使用液，用于標準曲線的配置。
4-MEI-D5標準儲備液的配置：稱取4-MEI-D5 9.38mg（至0.0001g）用水溶解后轉移至25ml容量瓶中，加水定容，配置成質量濃度為370μg/ml的標準儲備液，于4℃條件下保存。精密量取上述儲備液適量，加水制成1ml含0.5μg的對照內標使用液。
四、樣品處理
1提取：將啤酒倒入燒杯中超聲10min除盡熱氧化碳，取約5.0g（至0.01g）于100ml容量瓶中，加入水至刻度，混勻。10000rpm離心5 min，取上清液備用。
2凈化：移取約1.00ml提取液加入1.8ml水，加入100μl 0.02mol/L鹽酸溶液，加入100μl內標使用液，混勻后傾入已活化的固相萃取小柱中，待液體全部流出后，用3ml水、3ml甲醇淋洗小柱，用3ml含5%氨水的甲醇溶液洗脫，收集洗脫液。
四、濃縮
收集洗脫液置于45℃水浴氮吹濃縮至干，殘渣用1.00ml水溶解，過0.22μm濾膜后，待測。
五、檢測
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