一、實驗原理
生物膜的研究發展迅速,要研究生物膜的組成、結構及功能,首先必須分離出純凈的細胞膜。
分離狀態下的哺乳動物的紅細胞膜,一般稱為“血影”。哺乳動物的紅細胞中沒有通常真核生物細胞內所含有的任何細胞器,容易制備得到純粹的細胞膜,取材方面來源也十分方便,是研究細胞膜的好材料。
從哺乳動物紅細胞中分離細胞質膜,步是收集血液并置于加有抗凝劑的容器內,用低速離心的方法從血液中分離得紅細胞,然后用等滲緩沖液重復洗滌多次,去除血漿。第二步,將洗凈的紅細胞從等滲緩沖液轉移到低滲緩沖液中,由于滲透壓力作用于細胞質膜,使紅細胞膨脹而溶血。后一步,將溶血的紅細胞經過充分反復洗滌,高速離心,去除血紅蛋白和其他細胞內含物。這樣制備所獲得的終產品幾乎全是紅細胞膜。
二、實驗用品
(一)器材
(1)冰凍離心機。
(2)相差顯微鏡。
(二)試劑
(1)pH7.4的等滲磷酸酸鹽緩沖液
貯液A:稱取0.780g磷酸二氫鈉溶于水,定容至1000ml。
貯液B:稱取3.582g磷酸氫二鈉溶于水,定容于2000ml。
取380ml貯液A加1620ml貯液B,用少量濃HCL調PH至7.4,再稱17.53gNACL溶于其中。
(2)PH7.4低滲Tris.HCL緩沖液:
貯液A:稱取2.42gTris,溶于水,稀釋至500ml。
貯液B:取0.84ml36%-38%HCL,稀釋至500ml。
取500ml貯液A加414ml貯液B,用水稀釋至近于2000ml,用6mol/L HCL調PH室7.4,再定容至2000ml。
(3)肝素-PH7.4等滲磷酸鹽緩沖液:將肝素溶在PH7.4等滲磷酸鹽酸緩沖液中,每ml含肝素500單位。
(三)材料
哺乳動物的血液。
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