一、實驗原理
近年來,聚丙烯酰胺脲梯度電泳成為研究蛋白質去折疊與再折疊的非常重要的實驗技術之一。脲梯度電泳的基本原理是在常規的聚丙烯酰胺凝膠中加入非離子型變性劑-尿素,使其形成脲濃度梯度。
電泳時將脲梯度置于垂直電泳方向,使同一蛋白質樣品在連續變化的不同濃度的脲環境中電泳,蛋白質分子隨脲濃度變化而發生的結構狀態的變化,因而表現出不同的遷移率,終在顯色后的凝膠中呈現出反映蛋白質構象變化的二維圖像。
二、實驗用品
(一)器材
(1)Bio-Rad公司垂直板型電泳裝置。
(2)蠕動泵。
(3)梯度混合器、電磁攪拌器及電磁攪拌子。
(4)1ml 和100µL微量進樣器,注膠用的細長針管。
(二)試劑
(1)電極緩沖液的選擇:緩沖液的選擇取決于樣品蛋白質的性質,如等電點、溶解度、穩定性和實驗目的等。
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