H.Pylori IgG ELISA

原理

• 間接法：將幽門螺桿菌抗原包被在微孔板表面，加入待檢血清樣本后，如果樣本中存在幽門螺桿菌特異性 IgG 抗體，抗體就會與包被的抗原結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入酶標(biāo)記的抗人 IgG 抗體，它會與已結(jié)合在抗原上的 IgG 抗體結(jié)合，形成 “抗原 - IgG 抗體 - 酶標(biāo)抗 IgG 抗體" 復(fù)合物。加入底物后，酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色的深淺與樣本中幽門螺桿菌 IgG 抗體的含量成正比。通過酶標(biāo)儀測定吸光度值，與標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ毡容^，即可判斷樣本中是否存在幽門螺桿菌 IgG 抗體以及抗體的含量。

操作步驟

• 樣本采集與處理：采集靜脈血，待血液自然凝固后，離心分離血清。血清樣本應(yīng)在 2℃-8℃下保存，若不能及時檢測，需置于 - 20℃或更低溫度保存。

• 加樣：將標(biāo)準(zhǔn)品、陰性對照、陽性對照和處理后的樣本加入到包被有幽門螺桿菌抗原的酶標(biāo)板孔中，通常每孔加入一定量的樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，如 50μl 或 100μl，然后將酶標(biāo)板放入 37℃恒溫箱中孵育一定時間，一般為 30 分鐘至 1 小時。

• 洗滌：孵育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液沖洗酶標(biāo)板，通常洗滌 3-5 次，以去除未結(jié)合的物質(zhì)。

• 加酶標(biāo)抗體：向每孔中加入酶標(biāo)記的抗人 IgG 抗體，再將酶標(biāo)板放入 37℃恒溫箱中孵育，時間一般為 30 分鐘左右。

• 再次洗滌：重復(fù)洗滌步驟，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。

• 顯色：加入底物溶液，如四甲基聯(lián)苯胺（TMB），在酶的作用下底物發(fā)生顯色反應(yīng)，一般在室溫下避光反應(yīng) 15-30 分鐘，反應(yīng)后溶液會呈現(xiàn)藍(lán)色。

• 終止反應(yīng)：加入終止液，如硫酸溶液，終止顯色反應(yīng)，此時溶液顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。

• 讀數(shù)：用酶標(biāo)儀在特定波長下，如 450nm 波長處測定各孔的吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)樣本的吸光度值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計算出樣本中幽門螺桿菌 IgG 抗體的含量或判斷樣本的陰陽性。

臨床意義

• 診斷幽門螺桿菌感染：若檢測結(jié)果顯示血清中幽門螺桿菌 IgG 抗體陽性，表明患者曾經(jīng)感染過幽門螺桿菌。但不能區(qū)分是現(xiàn)癥感染還是既往感染，因?yàn)橛拈T螺桿菌被gen除后，抗體水平下降緩慢，一般 1-2 年才能轉(zhuǎn)陰1。

• 流行病學(xué)調(diào)查：由于該檢測方法操作簡便、成本相對較低，可用于大規(guī)模人群的幽門螺桿菌感染流行病學(xué)調(diào)查，了解不同地區(qū)、不同人群的幽門螺桿菌感染率。

• 治療效果評估輔助：在幽門螺桿菌gen除治療后，定期檢測 H.Pylori IgG 抗體水平，若抗體水平逐漸下降，提示治療有效；若抗體水平持續(xù)不降或升高，可能提示治療失敗或存在再次感染，但不能僅以此作為判斷依據(jù)，還需結(jié)合其他檢查方法。