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耗材專區 | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應用

閱讀：442 發布時間：2025-4-11

前言

在蛋白質組學研究中，C18 96孔板被廣泛應用于肽段脫鹽和純化步驟，尤其適用于高通量樣本處理，為下游質譜分析提供高質量樣本。

Empore™ C18 96孔板簡介

耗材專區 | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應用

Empore™ C18膜式固相萃取96孔板專為高通量固相萃取而設計，板的每個孔內都有一個有效直徑為5.5mm的C18固相萃取膜，固相萃取膜和其上方的預過濾層被壓環固定到每個孔的底部，預過濾層可有效提高大多數生物樣品前處理流速。有效直徑是指可用于樣品處理的萃取膜實際使用直徑。標準板的單孔儲液體積為1.2mL，深孔板的單孔儲液體積為2.5mL。如果樣品或試劑的體積超過板的單孔儲液體積，可分批次加液。

耗材專區 | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應用

Empore™ C18 96孔板技術優勢

高通量、低樣本損失、兼容自動化設備。
致密且穩定的膜結構消除了散裝填料孔板中存在的溝流和孔洞的問題，數據重現性更高。
薄薄的膜結構更易被洗脫，回收率更高。

C18 96孔板脫鹽原理

C18鍵合相（十八烷基硅烷）通過疏水相互作用吸附肽段，去除鹽分、去垢劑等雜質，隨后用有機溶劑洗脫肽段，實現脫鹽和濃縮。

實驗前準備

1、材料與試劑

CDS Empore™ C18 96孔板（貨號：70-2007-3982-2EA，規格：6015 C18-SD PLATE, 1.2mL, 1PCS）
緩沖液：

活化/平衡液：0.1%三氟乙酸（TFA）水溶液;

洗滌液：0.1% TFA/5%乙腈（ACN）;

洗脫液：0.1% TFA/50-80% ACN（或70% ACN/0.1%甲酸）。

真空抽濾裝置或離心機（適配96孔板）
肽段樣本（酶解后的復雜混合物）

2、板預處理

活化：每孔加入200μL 100% ACN，靜置1分鐘，抽干。
平衡：每孔加入200μL 0.1% TFA，重復2次，確保填料親水化。

脫鹽步驟

1、上樣

將肽段樣本（溶于0.1% TFA）加入孔中。
注意：樣本pH需≤3（TFA調節），以增強肽段與C18的結合。

2、洗滌

每孔加入200μL洗滌液（0.1% TFA/5% ACN），重復2-3次，去除鹽分和極性雜質。
真空抽干或離心去除液體。

3、洗脫

加入50-100μL洗脫液（如0.1% TFA/50% ACN），靜置1分鐘，收集洗脫液至收集板。
可重復洗脫1次以提高回收率。

4、干燥

合并洗脫液，真空離心干燥（如SpeedVac）后溶于質譜上樣緩沖液（如0.1%甲酸）。

關鍵參數優化

1、流速控制

手動操作時避免流速過快（依賴重力或離心）；自動化平臺可調至1mL/ min。

2、有機相比例

洗脫ACN濃度需優化（通常50-80%），過高可能導致疏水性雜質共洗脫。

3、樣本載量

避免超載（肽段載量：100μg左右/孔），否則會導致回收率低。

應用場景

1、質譜前處理

去除LC-MS/MS樣本中的鹽（如SDS、尿素、磷酸鹽）。

2、分級洗脫

與高pH反相分餾聯用，提高肽段覆蓋度。

3、自動化整合

適配液體處理工作站(如Labtech EmporeOmics、Tecan、Hamil-ton) 實現高通量。

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