細胞外泌體/微囊泡介紹中文版，外泌體是細胞分泌的納米囊泡（EV），其直徑大小為30-150nm之間，具有閉合的脂質雙分子層結構。 它幾乎存在于所有體液中，并在其表面以及胞內中攜帶各種分子（蛋白質，脂質和RNA等物質外泌體攜帶大量特異性的蛋白質（如細胞因子、生長因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質，在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗腫瘤免疫等生理過程，與多種疾病的發生和進程密切相關,由于外泌體的特殊結構和功能，使得它具有潛在的應用價值，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標，另一方面也可以作為治療手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治療.

近年來，研究成果表明，外泌體循環微粒是促成心血管炎癥、堵塞與損傷的因素，而過往由于常規設備在微小顆粒檢測上的局限性，使循環微粒這一重要因素在過去往往被排出在病因分析之列。Apogee納米級超高分辨率流式細胞儀，*的100納米散射光分辨率及10nm的靈敏度，突破外泌體與微囊泡研究瓶頸，前沿科學研究大爆炸！

外泌體檢測

常規流式細胞儀小檢測細胞直徑200-500nm細胞，而檢測100-200nm或更小的顆粒時是無法實現。尤其在檢測細胞外囊泡、外泌體、微顆粒微小顆粒常規流式更是難以檢測到，本文章通過Apogee A50-Micro 超納米級流式細胞儀檢乳腺癌與健康人血液內外泌體免疫標記抗體表達量、培養細胞與血清內外泌體進行對比。證實此款流式是目前檢測外囊泡的*能夠實現100納米級以內靈敏度的流式細胞儀。

通常情況下提取外泌體、微囊泡均為分離純化方法。如超速離心、免疫磁珠、超濾、沉淀或試劑盒等方法

圖A：通過差異離心速率獲得乳腺癌MDA-MB-231細胞和人血清中外泌體蛋白。 耗時3小時

圖B：通過使用試劑盒方法獲得外泌體分離，

圖C：通過NTA觀察，外泌體的平均大小為89±33nm，表面電荷為約30mV，

圖D E F：通過免疫印跡和免疫熒光染色方法分析CD63，CD81和LAMP2B存在，血清中分離外泌體Grp94的不表達情況。

實驗證明：傳統方法只能獲得廣泛性、某一類別的外泌體、囊泡及雜質物質，無法針對性、性獲得到實驗目的蛋白，脂質等。

培養細胞

圖A：Apogee A50- Micro*光散射器， 小角度光散射（SALS），中角光散射（MALS）和大角度光散射（LALS）檢測細胞內部顆粒，
圖D，E  F：Apogee Mix *微珠微珠作為內參，設置閾值。
圖G：設置樣本空白、同型對照可以觀察到MDA-MW-231 MCF-12A細胞外泌體樣本的、anti-CD44抗體表達情況。
圖H: 應用免疫印跡MDA-MW-231 與MCF-12A細胞對比CD44抗體，β-actin做內參。

實驗證明： 超納米級流式比免疫印跡方法學更、尤其對熒光較弱不會導致不可信數據。

乳腺癌監測

應用流式細胞儀與CD47 -ELISA方法學對比乳腺癌患者與健康人群中監測CD47表達量的動態變化， 可以監測巨噬細胞摧毀癌細胞的能力。

A、C 圖：顯示健康人對照（A）乳腺癌患者（C）血液標本通過MALS 和LALS 散射光信號讀取的散點圖。
B、D圖： 顯示兩組樣本外泌體CD47表達異常，乳腺癌組CD47明顯表達減少，統計學差異P值=0.004說明巨噬細胞啟動吞噬效力。
E圖：在B、D圖個選取N=60人份血液標本。 未配對t檢驗，P值<0.05.
F圖：通過ELISA 測量健康人N=40人份，乳腺癌N=50份，CD47表達量，未配對t 檢驗，P值<0.01.

實驗證明：超納米級流式無法匹敵的散射光和分辨率可以檢測不同細胞領域，通過健康人與乳腺癌患者CD47抗體表達量的不同，可以判定癌癥療效和預后指標。

參