導(dǎo)讀:
分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。
光度計特點:
1.采用微機控制并進行數(shù)據(jù)處理。
2.用干涉濾光片作為分光元件,光電管進行光電轉(zhuǎn)換。
3.具有鉀、鈉濃度直讀,曲線擬合,靈敏度漂移,自動校正,自動調(diào)滿度?;鹧婺芰恐甘荆僮魇д`顯示,打印結(jié)果等功能。
4.線性穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好,尤其適合臨床應(yīng)用。
分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器。
而分光光度法則是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進行定性和定量分析。 常用的波長范圍為:(1)200~400nm的紫外光區(qū),(2)400~760nm的可見光區(qū),(3)2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度,所有儀器應(yīng)按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,定期進行校正檢定。 單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時,被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關(guān)系如下式:
A=-log(I/I。)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸收度;
I。為入射的單色光強度;
I 為透射的單色光強度;
T 為物質(zhì)的透射比;
k 為吸收系數(shù);
L 為被分析物質(zhì)的光程
c 為物質(zhì)的濃度
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長,以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后,可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū),除某些物質(zhì)對光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應(yīng)用標準品或?qū)φ掌吠瑫r操作。
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