體液鈣離子濃度比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

 體液鈣離子濃度比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)鄰甲酚酞絡(luò)合酮，在堿性條件下與鈣離子反應(yīng)產(chǎn)生紫藍(lán)色復(fù)合物，在分光光度儀下通過(guò)吸光峰值的變化，即采用比色法來(lái)測(cè)定樣品中總鈣離子濃度的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種體液包括血漿、血清、尿液、腦脊液、唾液、精液等樣品中總鈣離子的濃度檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，檢測(cè)敏感。

技術(shù)背景

鈣是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì)，占1150克。其中99％的鈣以氟磷灰石鈣（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細(xì)胞內(nèi)。鈣具有兩種主要形式：一種是非彌散型蛋白結(jié)合鈣，其構(gòu)成約40％至50％的血清中的總鈣含量；另一種為彌散型游離鈣，其進(jìn)一步分成具有活性的復(fù)合鈣（complexed calcium）和離子鈣（ionized calcium）。鈣對(duì)神經(jīng)肌肉興奮性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運(yùn)輸、釋放神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)、信使傳導(dǎo)等方面起著重要作用。鈣的檢測(cè)包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技術(shù)，但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾，或者受限于儀器的特殊的要求。鄰甲酚酞絡(luò)合酮（o-cresolphthalein complexone；CPC）比色法是一種穩(wěn)定、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的鈣檢測(cè)技術(shù)。鈣與鄰甲酚酞絡(luò)合酮，在堿性條件下反應(yīng)產(chǎn)生紫藍(lán)色復(fù)合物，在分光光度儀下通過(guò)吸光峰值的變化（波長(zhǎng)570nm），來(lái)定量測(cè)定體液鈣的總濃度。其反應(yīng)系統(tǒng)為：

產(chǎn)品內(nèi)容

 緩沖液（Reagent A） 毫升

 反應(yīng)液（Reagent B） 毫升

 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C） 微升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)樣品配制和樣品保存的容器

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品制備

比色皿：用于反應(yīng)的容器

分光光度儀：用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 樣品準(zhǔn)備

選擇一：血漿樣品

• 準(zhǔn)備好肝素或ACD抗凝管（注意：避免使用EDTA抗凝管）
• 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
• 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存

選擇二：血清樣品

1． 準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲(chǔ)存管 

• 抽取1毫升血液，置于儲(chǔ)存管里
• 室溫下，靜置30分鐘，直至血液凝結(jié)
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）
• 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存

選擇三：尿液/腦脊液/唾液/精液樣品 

• 準(zhǔn)備好1.5毫升離心管
• 移取1毫升液體到離心管 
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管
• 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存

• 測(cè)定準(zhǔn)備

• 準(zhǔn)備好上述制備的待測(cè)樣品，置于冰槽里備用
• 設(shè)定好分光光度儀：波長(zhǎng)570nm，并置零 
• 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管
• 分別加入xx微升 緩沖液（Reagent A）到2至5號(hào)管
• 移取xx微升 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到1號(hào)管，混勻
• 小心移取xx微升1號(hào)管的 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到2號(hào)管，混勻
• 小心移取xx微升2號(hào)管稀釋的 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到3號(hào)管，混勻
• 小心移取xx微升3號(hào)管稀釋的 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到4號(hào)管，混勻
• 將1至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表

三、比色測(cè)定

• 移取xx微升 緩沖液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
• 加入xx微升 反應(yīng)液（Reagent B）
• （選擇步驟）放進(jìn)分光光度儀，置零
• （選擇步驟）取出比色皿
• 加入100微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液或待測(cè)樣品 
• 上下傾倒數(shù)次，混勻
• 室溫下孵育5分鐘，避免光照
• 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)：獲得吸光讀數(shù)（OD）
• 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光單位（OD）；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)鈣濃度（毫摩爾/升）
• 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)鈣濃度 
• 計(jì)算樣品實(shí)際鈣濃度

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為25次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)液
• 操作時(shí)，須戴手套
• 避免使用EDTA等處理樣品
• 建議樣品保存在－70℃冰箱里
• 系統(tǒng)操作過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)液測(cè)定只需1次
• 孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行比色測(cè)定
• 如果樣本鈣離子過(guò)低，可以增加孵育時(shí)間至30分鐘
• 比色測(cè)定后，比色皿須清洗*
• 如果用戶沒(méi)有匹配的濾波器，可以使用570nm至600nm之間的任一波長(zhǎng)
• 如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低，可以調(diào)整樣品濃度
• 檢測(cè)敏感度在5微摩爾至4毫摩爾鈣濃度范圍
• 本公司提供系列鈣生化檢測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感