冰凍切片氧化應激活性氧超氧陰離子MitoSOX紅色熒光測定試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

  冰凍切片氧化應激活性氧超氧陰離子MitoSOX紅色熒光測定試劑是一種旨在通過透膜熒光染色劑MitoSOX，在線粒體氧化損傷條件下，產生紅色熒光，來檢測冰凍組織細胞線粒體內超氧陰離子活性氧族的存在狀況的*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適宜于冰凍動物組織細胞線粒體內的超氧陰離子分析。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老、代謝和營養學等的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡易，定性檢測，性能穩定。

技術背景

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2^-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH^-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態氧氣（singlet oxygen）等細胞內活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產生和增多，將導致細胞衰老或凋亡。其中線粒體氧化磷酸化副產物之一是超氧陰離子，為線粒體內最主要的活性氧族，與心血管疾病，包括高血壓、冠狀動脈硬化、糖尿病相關的血管疾病、神經退行性疾病（巴金森氏癥、阿茨罕默癥、肌*硬化癥）相關。MitoSOX是一種*自由通過細胞膜，并選擇性在活體細胞線粒體內長期滯留而不外漏的染色劑。一旦被超氧自由基陰離子氧化，便產生熒光。據此證明細胞線粒體內超氧陰離子活性氧族的存在。 

產品內容

  清理液（Reagent A）            毫升

  染色液（Reagent B）            微升

  稀釋液（Reagent C）            毫升

產品說明書               1份

保存方式

保存  染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

培養箱或恒溫水槽：用于染色孵育

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于觀察熒光組織細胞

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的  染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，  稀釋液（Reagent C）置于室溫預熱。然后移出xx微升  染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升  稀釋液（Reagent C），混勻后，標記為  染色工作液，置入暗室里。然后進行下列操作。

1． 準備5片待測的厚為10微米的未經固著處理的冰凍切片

2． 置于室溫下，小心加上xx微升預冷的  清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面

3． 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）

4． 小心加上xx微升室溫預熱的  染色工作液，鋪滿整個切片表面

5． 在37℃濕潤培養箱里，孵育10分鐘（注意：避免液體蒸發）

6． 小心移去切片上的  染色工作液，避免光照

7． 小心加上xx微升  清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面

8． 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）

9． 放上蓋玻片或封片

10． 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下觀察（定性檢測）：激發波長510nm，散發波長580nm――紅色熒光增強，表明超氧陰離子含量高

注意事項

1． 本產品為20次操作

2． 建議使用新鮮組織（手術切除后1小時內）制成的冰凍切片

3． 操作時，須戴手套

4．   染色工作液避免光照

5． 孵育時，須避免光照

6． 建議組織染色完成后，即刻進行熒光定性分析

7． 本公司提供系列活性氧檢測試劑產品

質量標準

1． 本產品經鑒定性能穩定

2． 本產品經鑒定熒光清晰