免疫親和柱基于抗原抗體反應,特異性抗體連接在柱體內,選擇性吸附樣品中的待檢物,雜質不被吸附,流出柱外,柱上結合的目標物再被特定的洗脫液洗下來,可以用于液相色譜分析或者ELISA含量測定,是一種高效的前處理柱??蛇x擇性吸附樣品液中的毒素,從而對樣品起到非常針對性的純化作用,經過柱凈化后的樣品液可直接用于HPLC分析。它與HPLC配合使用可達到快速測定的目的,以改善信噪比,提高檢測方法的準確度。
下面咱們來了解下免疫親和柱的使用技巧,希望能夠幫助到大家:
1、上柱的樣品溶液應該保持酸堿中性、無懸浮物、甲醇濃度不宜過高。
2、若樣品為復雜樣品,例如高蛋白、高油脂、酸性樣品,可以將提取液分兩次提取樣品,可以提高提取效果。
3、樣品過柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻,約每秒1-2滴。
4、抗原抗體發生反應的最佳溫度是在25℃左右,實驗需要的環境溫度應是室溫24℃-28℃,太高或太低的溫度都會對回收率有一定的影響。在使用前需要恢復至室溫再進行實驗。
5、不要在無水狀態下,瓊脂容易干燥縮,影響質量。
6、儲存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫,因為緩沖液凍結,會嚴重影響親和柱內的物理結構,對質量影響很大。
7、洗脫一般選擇試劑甲醇,為增強洗脫效果可加大甲醇體積。
值得注意的是當測試不同的洗脫條件時,有些緩沖液雖然不能洗脫抗原,但在其他條件改變后仍可能是有效的洗脫緩沖液。實際上有些非洗脫緩沖液,可能改變抗原抗體反應的平衡。例如高鹽條件具有疏水作用。應用這些條件可以比較容易地收集抗體基質上的抗原。
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