MX80070.1 v.A

  細胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法（SCHMORL）染色試劑盒產品說明書

（中文版）

主要用途

  細胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法（SCHMORL）染色試劑是一種旨在使用鐵還原法技術，分析細胞樣品中晚期脂褐素沉積現象，從而在光學顯微鏡下觀察到藍色表達的細胞作為細胞復制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老細胞的而經典的技術方法。該技術經過精心改良SCHMORL方法、成功實驗證明的。主要適用于動物細胞的晚期脂褐素檢測。廣泛應用于細胞生物學研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。  

技術背景

細胞復制性衰老是細胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期，表現出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細胞衰老的特征性生物學標記。脂褐素（lipofusin），又稱為“磨損（wear and tear）”色素，是一種細胞內與年齡相關的棕黃色熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細胞的繼發性溶酶體內。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細胞里，例如心臟、肝臟和神經等，尤其在衰老誘導的細胞退變中聚集增多，特別是的組織。脂褐素來自于氧化的蛋白和脂質，成為細胞衰老中后期的獨立指征。脂褐素分為早期和晚期，晚期脂褐素作為較強還原性物質，在鐵離子的存在下，使鐵（ferricyanide）轉化為亞鐵（ferrocyanide），產生不可溶性普魯士藍（Prussian blue）產物，顯示藍色。

產品內容

  清理液（Reagent A）              毫升

  固著液（Reagent B）          毫升

  染色液（Reagent C）          毫升

  酸性液（Reagent D）          毫升

產品說明書               1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；   染色液（Reagent C）避免光照；有效保證3月

用戶自備

小型染色缸：用于細胞染色操作

光學顯微鏡：用于觀察染色后的細胞

實驗步驟

操作一：細胞載玻片染色

1． 取出待測的細胞載玻片或細胞涂片 

2． 小心加上xx微升  清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

3． 小心移去載玻片上的  清理液（Reagent A）

4． 小心加上xx微升  固著液（Reagent B）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

5． 在室溫下孵育5分鐘

6． 小心移去載玻片上的  固著液（Reagent B）

7． 小心加上xx微升  清理液（Reagent A），清洗樣品表面

8． 在室溫下孵育2分鐘

9． 小心移去載玻片上的  清理液（Reagent A）

10． 小心加上xx微升  染色液（Reagent C）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

11． 在室溫下孵育10分鐘

12． 小心移去載玻片上的  染色液（Reagent C）

13． 小心將載玻片置入xx毫升  清理液（Reagent A）的小型染色缸里 

14． 室溫下孵育2分鐘

15． 取出載玻片，小心移去載玻片上的  清理液（Reagent A）

16． 小心加上xx微升  酸性液（Reagent D）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

17． 在室溫下孵育5分鐘

18． 小心移去載玻片上的  酸性液（Reagent D）

19． 小心加上xx微升  清理液（Reagent A），清洗樣品表面

20． 小心移去載玻片上的  清理液（Reagent A）

21． （選擇步驟）復染（建議使用  核固紅復染試劑盒——   40011）

22． 放上蓋玻片或封片（水相或中性樹脂）

23． 即刻在一般光學顯微鏡下觀察（注意：參見注意事項3）：脂褐素陽性細胞呈現藍色，細胞核呈現紅色（如果復染）

操作二：24孔細胞培養板染色

1． 小心抽去24孔細胞培養板里的培養液

2． 每孔加入xx微升  清理液（Reagent A），清洗生長中的細胞表面

3． 小心抽去每孔里的  清理液（Reagent A）

4． 每孔加入xx微升  固著液（Reagent B），覆蓋整個生長表面

5． 在室溫下孵育5分鐘

6． 小心抽去每孔里的  固著液（Reagent B）

7． 每孔加入xx微升  清理液（Reagent A），清洗細胞表面

8． 在室溫下孵育2分鐘

9． 小心抽去  清理液（Reagent A）

10． 每孔加入xx微升  染色液（Reagent C），覆蓋整個生長表面

11． 在室溫下孵育10分鐘

12． 小心抽去  染色液（Reagent C）

13． 每孔加入xx微升  清理液（Reagent A），清洗細胞表面

14． 在室溫下孵育2分鐘

15． 小心抽去  清理液（Reagent A）

16． 重復實驗步驟13至15二次

17． 小心加上xx微升  酸性液（Reagent D），覆蓋整個生長表面

18． 室溫下孵育5分鐘

19． 小心抽去  酸性液（Reagent D）

20． 小心加入xx微升  清理液（Reagent A）

21． 小心抽去  清理液（Reagent A）

22． （選擇步驟）復染（建議使用  核固紅復染試劑盒— 40011）

23． 小心加入xx微升  清理液（Reagent A）

24． 即刻在一般光學顯微鏡下觀察（注意：參見注意事項3）：脂褐素陽性細胞呈現藍色，細胞核呈現紅色（如果復染）

注意事項

1． 本產品為50次（細胞載玻片）和25次（1個24孔板）操作

2． 本產品還可以染色其它還原性物質，包括黑色素（melanin）、肝膽汁（liver bile）、腸嗜鉻細胞（enterochromaffin）等

3． 本產品不同于其它脂褐素組化染色，其基于生化反應產生的顯色反應，與樣品的關聯性很強。樣品的狀態，例如新鮮與否、置于空氣時長等，會嚴重影響染色效果

4． 操作時，須戴手套

5． 使用時，避免污染母液

6．   染色液（Reagent C）避免光照

7． 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面

8． 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察

9． 本公司提供系列細胞衰老分析試劑產品

質量標準

1． 本產品經鑒定性能穩定

2． 本產品經鑒定著色清晰